[发明专利]一种玉露细胞防褐化培养方法

说明书

一种玉露细胞防褐化培养方法，其特征在于，其包括下述步骤：将玉露细胞培养物接种到无菌三角瓶内，在三角瓶内加入培养液，无菌三角瓶放在摇床上进行增殖悬浮培养，取前述步骤所得的玉露细胞培养物的滤液，加入培养液，接种到无菌三角瓶内，无菌三角瓶放在摇床上进行防褐化悬浮培养；本方法直接取玉露愈伤组织细胞作为外植体，先进行悬浮培养基，再固体培养；同时使用喜马拉雅冰川水来培养玉露细胞组织，发现冰川水不仅可以作为一种防褐剂，能有效防止和解决玉露细胞组织培养中的褐化现象；也可作为一种添加剂加入培养基中，促进植物细胞组织的增殖，为玉露细胞组织培养及产业化提供科学参考。

技术领域

本发明涉及植物培养领域，具体地是一种玉露细胞防褐化培养方法。

背景技术

玉露为多肉植物，其肉质叶通透似玉、晶莹圆润，如同艺术品般可摆放于阳台或书桌上，因此，备受多肉植物爱好者的欢迎。玉露园艺品种繁多，因其叶色晶莹剔透且富于变化而受到人们的追捧，从而导致行情火爆、价格偏高。 它的繁殖培育方法可以有分株、扦插、叶插、播种等。

在植物组织培养过程中，褐化是一种常见的现象且会直接影响组培成功与否，该现象是外植体由于自身分泌的酚类化合物的影响导致外植体褐变褐化。在植物组织培养过程中，如愈伤组织培养，细胞悬浮培养以及原生质体培养等，植物外植体组织或培养物由于被切割等引起的损伤，细胞中的酚类物质在有氧情况下经多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）催化后形成醌类物质，再通过聚合作用产生有色物质而导致组织呈褐色，这些褐色物质会逐渐扩散到培养基中抑制其它酶的活性，从而影响其它组织的生长和代谢。这样使植物组织或细胞产生褐变的现象称为褐化现象，也被称为酚污染。

褐化不仅会严重影响植物外植体的鲜活度，而且还会干扰愈伤组织的诱导和再生，严重阻碍有效成分的快速积累和组培技术的成功率。目前在组织培养中常用的防褐剂可分为防止酚氧化的抗氧化剂和吸收醌类物质的吸收剂两大类，主要有抗坏血酸（Vc），半胱氨酸， 柠檬酸（CA），聚乙烯吡咯烷酮（PVP），活性炭（AC）等等。

具体到玉露培育领域，在先技术CN104792486A、CN106857256B以及CN109526750A提到的玉露培育均为取叶片为外植体诱导成植株，主要是为了大规模且快速培育植株，以整株为产品销售，但均未提及植物悬浮培养也不涉及防褐化处理。

冰川水是地表上长期存在并能自行运动的天然冰体。由大气固体降水经多年积累而成，是地表重要的淡水资源，不同于冬季河湖冻结的水冻冰。有报道称冰川水的生理特性有激活植物生长的作用，是由于冰川水进入细胞膜后有易于生物分子损伤后的修复。已有学者研究了利用了祁连山冰川水、纯水及蒸馏水对植物的种子进行萌发及植物组织培养，发现种子萌发率没有显著性差异，组织培养中仅诱导了小块绿色愈伤组织的形成，但未发现该冰川水能够促进植物细胞组织增殖及防褐化。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于植物培育，尤其是玉露细胞组织培育，进一步的在培育过程中，解决植物褐化问题。

本发明涉及一种玉露细胞防褐化培养方法，其特征在于，其包括下述步骤：

A、将玉露细胞培养物接种到无菌三角瓶内；

B、在三角瓶内加入培养液；

C、无菌三角瓶放在摇床上进行增殖悬浮培养；

D、取步骤C所得的玉露细胞培养物的滤液，加入培养液，接种到无菌三角瓶内；

E、无菌三角瓶放在摇床上进行防褐化悬浮培养。

其中，步骤A中的玉露细胞培养物为未褐化玉露细胞培养物，三角瓶容积150ml；步骤B中的培养液取40ml，以冰川水为溶剂，培养液配方为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L。