[发明专利]一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建及其应用

说明书

本发明公开了一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建及其应用，具体涉及疫苗和药物开发及评估研究领域，其中构建的步骤：接种动物准备、菌液制备、动物接种、临床观察和解剖鉴定。本发明豚鼠模型饲养方便，易于操作，能够较强的表现出SS9感染的典型临床症状及病理变化，与仔猪自然感染情况相似，重复性好；构建了猪链球菌9型感染豚鼠动物模型，可用于开展SS9致病性、感染机制及疫苗和药物开发及评估研究工作。

技术领域

本发明涉及疫苗和药物开发及评估研究技术领域，更具体地说，本发明涉及一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建及其应用。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是一种重要的人畜共患病病原，是链球菌属。猪链球菌的定植部位为猪的上呼吸道，尤其是扁桃体和鼻腔。部分血清型的猪链球菌具有致病性，可引起猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎、心内膜炎、肺炎等疾病。部分菌株可引起人类感染，造成细菌性脑炎(bacterial meningitis)或引起中毒样休克综合征(toxicshock-like syndrome)。SS呈世界性流行，对养猪行业和公共卫生安全造成重大的威胁。按荚膜抗原的特性，据其荚膜抗原(CPS)的不同，猪链球菌被分为35个血清型(1-34型和1/2型)，其中1型、2型(1/2型)、7型、9型的致病力最强。近几年来，SS2多次引起猪链球菌病的暴发，并可感染人致死，成为当前重要的人畜共患病之一。血清型2为最常见和毒力最强的血清型。致病因子有荚膜、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素。荚膜可以保护细菌，抵抗吞噬。溶菌酶释放蛋白、细胞外因子的存在提高了菌株的致病力。

猪链球菌２型流行最广、毒力最强，是我国主要致病血清型，近几年，猪链球菌9型（SS9）检出率和分离率呈上升趋势，急需开展猪链球菌9型流行病学、致病性、感染机制及疫苗开发的研究工作。虽然国内外有利用小鼠、兔子、豚鼠和斑马鱼来研究SS2感染的动物模型，但是却缺少研究SS9感染的动物模型，无法开展SS9致病性、感染机制及疫苗和药物开发及评估研究工作。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的实施例提供一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建，通过构建的猪链球菌9型感染豚鼠动物模型，用于开展SS9致病性、感染机制及疫苗和药物开发及评估研究工作。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建，其中构建的步骤：

S1、接种动物准备：选取4-6周龄豚鼠，分为正常对照组（n=6）、PBS对照组（n=6）与6个实验组（n=6×6），在相同环境下按照分组隔离饲养5-7d；

S2、菌液制备：使用稀释液对猪链球菌9型菌进行稀释，分别配置六组不同浓度的猪链球菌9型菌液；

S3、动物接种：将S1步骤中的正常对照组不做处理，PBS对照组通过腹腔注射1mL的PBS缓冲液，6个实验组分别通过腹腔注射S2步骤中制备的不同梯度浓度的猪链球菌9型菌液1mL；

S4、临床动物观察：对步骤S3中各组豚鼠在相同环境进行隔离饲养，期间进行正常的水、食喂养，观察1周豚鼠的发病及死亡率情况；

S5、对死亡豚鼠进行解剖，取脑、心、肝、脾和肺组织进行细菌分离鉴定和各个器官中细菌分布及载量测定；

S6、对分离到的细菌通过猪链球菌谷氨酸脱氢酶基因和荚膜多糖基因PCR方法进行SS9鉴定并测序；

S7、对各组豚鼠进行解剖，对其的脑、心、肝、脾和肺进行组织病理切片鉴定。

在一个优选地实施方式中，所述S1步骤中各组豚鼠长度和体重应选取大致相当，并模拟生态环境进行饲养。

在一个优选地实施方式中，所述S2步骤中的稀释液设置为PBS缓冲液。