[发明专利]一种PNCK基因的PCR检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种PNCK基因的PCR检测试剂盒及应用，所述试剂盒包括PNCK基因检测引物、内参引物；本发明试剂盒灵敏性好，特异性强，在临床应用中具有良好的适应性和实用性，本试剂盒提供3对检测引物，相比传统只使用1对检测引物大大减少结果的随机性，更具统计学意义，结果更加准确可靠；试剂盒内的检测引物检测具有很高的灵敏度，仅需少量样本即可完成筛查；本试剂盒同时提供PNCK蛋白抗体，可同时进行蛋白含量与基因转录水平两种方式检测，筛查结果更加准确可靠，进一步提升检测准确度和有效性。

(一)技术领域

本发明涉及一种检测PNCK基因的试剂盒及应用。

(二)背景技术

乳腺癌是全球女性癌症中最常见的恶性肿瘤之一，通常发生在乳腺上皮组织，是一种复杂的异质性疾病。乳腺癌主要表现为乳房肿块、乳房形状改变、乳头分泌物，甚至会有骨痛、淋巴结肿大、呼吸困难或黄疸的情形。据统计，在我国乳腺癌的发病率位居女性恶性肿瘤的第一位，在全球妇女癌症中的发病率仅次于子宫癌。世界上每3分钟就有一位女性被诊断为乳腺癌，每13分钟就有一位女性死于乳腺癌。乳腺癌不仅严重影响着女性的身心健康，其一旦通过血液或淋巴转移到全身各处就极有可能危及生命。因此，乳腺癌的精确诊断尤为重要。

乳腺癌的早期发现、早期诊断是提高治疗效果的关键。目前的诊断方法有X射线、B超、导管镜、活检等。但我们现有的手段难以预测患者的癌症是否会发生转移，因此只能采取过度治疗的方式，对患者造成了额外的生理及心理伤害。

PNCK又称CaMKIβ，即钙离子依赖性蛋白激酶1B，是一种钙离子依赖性蛋白激酶，钙离子与PNCK结合，激活PNCK，从而钙离子信号通路被激活。乳腺癌肿瘤处于长期缺氧的状态，诱导胞内的钙离子水平高于正常周围组织，因此乳腺癌肿瘤中的PNCK常处于异常激活态，调控着恶性肿瘤的生长、代谢和死亡。

本发明开发了一个基于PNCK分子标记的乳腺癌诊断试剂盒，只需少量病例样本，按照所提供的方法进行检测，即可对临床乳腺癌的发生及预后效果诊断提供依据。该试剂盒为乳腺癌的术前精确诊断、预后准确评估乳腺癌的转移提供了新的高灵敏，高特异性的分子检测标志，具有很高临床应用价值。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种检测PNCK基因的试剂盒及应用，该试剂盒内包含了三对PNCK表达水平检测引物，一对B2M内参引物，一支用于检测PNCK蛋白水平的PNCK兔单克隆抗体，一支Vinculin蛋白内参抗体。该试剂盒可用于辅助乳腺癌的筛查和预后调查，具有高特异性，稳定性，灵敏性的特征，具有极大的潜在应用价值。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种PNCK基因的PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括PNCK基因检测引物、内参引物，

所述检测引物为PNCK#1、PNCK#2或PNCK F#3中的一组：

PNCK F#1：5’-CTCAAGCCCGAAAACCTCCT-3’；

PNCK R#1：5’-CAGAAGGTGCCGGATGAAGT-3’。

PNCK F#2：5’-GCTCTTGGAGCAGAAACCCT-3’；

PNCK R#2：5’-TCATAGCTGGCCCTCAGGAT-3’。

PNCK F#3：5’-AGCTCTTGGAGCAGAAACCC-3’；

PNCK R#3：5’-CTGTTGGCAGGTGAACCTCT-3’。

内参引物B2M F：5’-AGA TGAGTA TGC CTG CCG TG-3’；B2M R：5’-TCA TCC AATCCA AAT GCG GC-3’。