[发明专利]利用具有荧光性能的共价有机纳米球检测酪氨酸酶的方法

权利要求书

1.一种利用具有荧光性能的共价有机纳米球检测酪氨酸酶的方法，包括以下步骤：

（1）具有荧光性能的共价有机纳米球的制备：将三（4-氨基苯基）胺（TAPA）和三（4-氨基苯基）醛（TFPA）以等摩尔比超声分散N,N-二甲基甲酰胺中形成均相溶液；再加入甲醇为反应溶剂，乙酸为催化剂，在室温~70℃下反应0.5~5.0 h；反应结束后经离心、洗涤、干燥，即得；

（2）酪氨酸酶的检测：将上述制备的具有荧光性能的共价有机纳米球与酪氨酸在缓冲溶液中涡旋混匀，加入一系列不同浓度的酪氨酸酶溶液，在室温~40℃下孵育0.5~1.5 h；在激发波长为432 nm，发射波长为580 nm下进行荧光测量；根据不同浓度的酪氨酸酶溶液猝灭共价有机纳米球的荧光程度不同，构建体系在580 nm处的荧光强度与酪氨酸酶溶液之间的线性关系，即可定量检测酪氨酸酶活性；

酪氨酸酶浓度区间在0.005~15 μg/mL内，体系在580 nm处的荧光强度与酪氨酸酶浓度的对数值之间存在以下线性关系：

Y=-130.46X+194.07

其中，Y为体系的荧光强度，X为酪氨酸酶浓度的对数值。

2.如权利要求1所述一种利用具有荧光性能的共价有机纳米球检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：步骤（1）中，催化剂乙酸的用量为原料有机醛和有机胺总摩尔量的3.0~6.0倍。

3.如权利要求1所述一种利用具有荧光性能的共价有机纳米球检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述缓冲溶液为磷酸钠-氯化钠缓冲溶液，pH值范围为6.0~7.4。