[发明专利]一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法在审
| 申请号： | 201910930382.0 | 申请日： | 2019-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN110616257A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 秦清明;李治利;易先国;张自富;赵云焕;赵瑜;朱忠珂 | 申请（专利权）人： | 信阳农林学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6879 | 分类号： | C12Q1/6879;C12Q1/6888;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 41162 郑州明华专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 高丽华 |
| 地址： | 464000 河南省信阳*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 禽类 判定 琼脂糖凝胶电泳检测 早期性别鉴定 鉴定效果 扩增产物 性别鉴定 整体操作 单条带 扩增 条带 无损 羽毛 采集 | ||
1.一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)采集单性态禽类1-2根含有羽髓的羽毛；
(2)将羽毛中的羽髓置于无菌EP管中，加入80μL 0.2mol/L的NaOH，涡旋混匀，于95℃条件下加热5-10min，再加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清；
再次加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清，风干待乙醇完全挥发，加入100μL TE溶液溶解，涡旋混匀，获得基因组DNA样品，将基因组DNA样品进行稀释，于-20℃保存备用；
(3)以提取的DNA为模板，采用PCR扩增引物进行PCR扩增；
(4)将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增结果为单条带则判定为雄性；扩增结果为双条带则判定为雌性。
2.根据权利要求1所述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：步骤(2)中是将羽毛中的羽髓置于无菌EP管中，加入80μL0.2mol/LNaOH，涡旋混匀，于95℃条件下加热10min，再加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清；再次加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清，风干待乙醇完全挥发，加入100μL TE溶液溶解，涡旋混匀，获得基因组DNA样品，将基因组DNA样品稀释50倍，于-20℃保存备用。
3.根据权利要求1所述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：步骤(1)中采集的羽毛为单性态禽类翅膀处的羽毛。
4.根据权利要求1所述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：所述PCR扩增引物为：
2550F：5’-GTTACTGATTCGTCTACGAGA-3’；
2718R：5’-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3’。
5.根据权利要求1所述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：PCR反应体系包括：2×PCR TaqMaster Mix
5μL，上、下游引物各0.2μL，DNA模板1μL，ddH2O3.6μL。
6.根据权利要求1所述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，退火温度54℃，时间30s，72℃延伸30s，共33个循环；
72℃5min；12℃保存。
7.根据权利要求1所述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：步骤(2)中所述DNA样品稀释的倍数为50或100倍。
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