[发明专利]一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法

说明书

本发明属于禽类早期性别鉴定技术领域，具体涉及一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法。该方法通过采集早期禽类的含有羽髓的羽毛，通过简洁高效的方法对DNA进行提取，以提取的DNA为模板采用PCR扩增引物进行PCR扩增，然后将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增结果为单条带则判定为雄性，双条带则判定为雌性。本发明的方法与现有的方法相比提取的DNA浓度和纯度均明显较高，而且效果也明显优于其他方法，整体操作步骤简单、使用试剂少、耗费时间短、鉴定效果好，适用于大批量性别鉴定。

技术领域：

本发明属于禽类性别鉴定方法技术领域，具体涉及一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法。

背景技术：

常见的鹌鹑、肉鸽等，由于其具有较高的食用价值，而且繁殖周期短、生长速度快、饲养方便、使用成本低的优点已经成为禽类科学研究的主要模式动物之一。然而这类禽类，属于单性态禽类，是一种在早期无法通过外观鉴定雌雄的禽类，在科学研究中经常需要在早期就要对禽类性别进行区分以开展不同的试验研究，而且在生产上，为了能够顺利开展繁育工作、育种工作同样也需要在早期对禽类的雌雄进行区分。

目前禽类早期性别鉴定的方法是采用试剂盒鉴定或者通过采血提取血液DNA进行鉴定，但是试剂盒鉴定的成本每样高达5元、成本较高，步骤繁杂需要9步、工作量大，完成操作需要时间接近1h，不适合于大批量、大规模的使用；而且采血鉴定性别的方法对于那些体积小、早期体弱的单性态禽类造成伤害产生应激，不利于其后续的生长。因此提供一种快速、高效、价廉、对禽类无损的性别鉴定方法是目前急需解决的问题。

发明内容：

针对目前的禽类性别鉴定方法存在成本高、步骤繁琐、时间长、对早期禽类有损伤的缺陷和问题，本发明提供一种快速、高效、价廉、无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法。

本发明解决其技术问题所采用的方案是：一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)采集单性态禽类1-2根含有羽髓的羽毛；

(2)将羽毛中的羽髓置于无菌EP管中，加入80μL0.2mol/LNaOH，涡旋混匀，于95℃条件下加热5-10min，再加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清；再次加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清，风干待乙醇完全挥发，加入100μLTE溶液溶解，涡旋混匀，获得基因组DNA样品，将基因组DNA样品进行稀释，于-20℃保存备用；

(2)以提取的DNA为模板，采用PCR扩增引物进行PCR扩增；

(4)将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增结果为单条带则判定为雄性；扩增结果为双条带则判定为雌性。

上述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，步骤(2)中是将羽毛中的羽髓置于无菌EP管中，加入80μL0.2mol/LNaOH，涡旋混匀，于95℃条件下加热10min，再加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清；再次加入200μL无水乙醇，涡旋混匀，12000r/min离心3min，弃上清，风干待乙醇完全挥发，加入100μL TE溶液溶解，涡旋混匀，获得基因组DNA样品，将基因组DNA样品稀释50倍，于-20℃保存备用。

上述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，步骤(1)中采集的羽毛为单性态禽类翅膀处的羽毛。

上述的一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法，所述PCR扩增引物为：

2550F：5’-GTTACTGATTCGTCTACGAGA-3’；

2718R：5’-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3’。