[发明专利]一种用于检测乳腺癌HER2拷贝数变异的数字PCR方法及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测乳腺癌HER2拷贝数变异的数字PCR方法及检测试剂盒，所述试剂盒包括用于检测HER2基因拷贝数变异的至少一对引物及其相配套的一条探针，和用于检测的内参基因的一对引物及其相配套的一条探针。本发明的方法采用三组HER2基因的特异性引物探针和一组内参基因的方式进行，从而有效地排除了单一引物探针扩增导致的假阴性结果，因此相较于现有技术中具有更高的准确性，而且将现有方法的不确定区间1.8‑2.2降低至1.0‑1.2，具有更高的灵敏度。

技术领域

本发明涉及与肿瘤靶向治疗相关的基因检测技术领域，特别是涉及一种用于检测乳腺癌HER2拷贝数变异的数字PCR方法及检测试剂盒。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，每年新增病例100多万例，是一种严重威胁患者的健康甚至生命的疾病。不同患者对临床药物的治疗效果以及预后也可能存在很大不同。

HER2基因是位于人类第17号染色体长臂上的原癌基因，编码具有受体酪氨酸激酶(PTK)活性的人类表皮生长因子受体-2(human epidermaL growth factor receptor-2，HER2)跨膜糖蛋白，是表皮生长因子受体家族的成员，需与家族其他受体结合成异二聚体后发挥信号转导功能。HER2基因的过表达或扩增，会导致信号过度传递，将会刺激癌细胞生长转移。HER-2阳性乳腺癌约占侵袭性乳腺癌的20％～30％，该分型肿瘤的侵袭性高、复发风险高、进展快速及预后差。乳腺癌患者肿瘤细胞中HER2基因表达水平的测定有利于治疗方案的选择和预后判断。HER2分子作为乳腺癌重要的分子生物学标记物之一，是乳腺癌基因治疗的重要靶位点。

曲妥珠单抗，又名赫赛汀(Herceptin)是用于HER2阳性乳腺癌的靶向药物，已被美国FDA批准用于治疗HER2阳性乳腺癌。赫赛汀能特异性的结合在HER-2蛋白细胞膜外的第4个功能域，干扰HER2与其它ERBB家族成员形成异源二聚体，从而有效抑制肿瘤细胞的增殖。

目前，临床常规的HER2检测手段包括免疫组化(IHC)和荧光原位杂交技术(FISH)。IHC检测的是细胞膜上HER2蛋白的表达情况，检测结果为3+，即判定为HER2阳性，可以选择HER2靶向药物进行治疗；检测结果为0或1+，即可判定HER2阴性，不适合使用HER2靶向药物进行治疗；检测结果为2+时，需要结合FISH的结果来进行综合判断。FISH是以17号染色体着丝粒探针作为内参，通过计算HER2基因探针与17号染色体着丝粒探针杂交信号的比率(HER2/CEP17)来判断HER2基因是否有扩增。FISH检测结果大于2.2判定为HER2阳性，检测结果小于的1.8判定为HER2阴性，而检测结果为1.8-2.2之间的则无法准确判定。对于HER2阳性患者，可以使用HER2靶向药物，如赫赛汀等；而HER2阴性患者，则不推荐使用这类药物。

然而目前这两种检测方法都存在自身的不足，都存在结果无法准确判断的灰区，而且近年来也发现即使判定为阳性的患者对HER2靶向治疗的效果不佳，而一些疑似阳性的患者和部分阴性患者也对HER2靶向药物敏感。所以，根据IHC或FISH法检测的结果进行用药指导并不是十分准确，因此需要一种更灵敏更准确的HER2阳性乳腺癌的检测方法，来进行HER2靶向药物的指导，让更多的患者得到准确的治疗。

CN105986028A公开了一种利用ddPCR技术检测乳腺癌HER2阳性的方法，其试剂盒包括用于检测HER2基因的两对引物，和用于检测CEP17基因的一对引物、用于检测EFTUD2基因的2对引物。但是，该专利申请的技术方案只能解决常规方法判断为疑似阳性的样本是否存在HER2阳性，而无法解决常规方法即使判断为阴性而实际为假阴性的样本，这种样本由于发生的是染色体倍增，所以导致常规方法和该专利申请的方法均无法彻底的准确判断HER2阳性。

综上所述，本领域缺乏一种能够准确有效地检测HER2拷贝数变异的方法及试剂盒。

发明内容