[发明专利]一种负载鹿茸多肽的Ⅰ型/Ⅲ型胶原软骨修复支架

说明书

本发明公开一种负载鹿茸多肽的Ⅰ型/Ⅲ型胶原软骨修复支架。该支架以牛源型胶原蛋白、人重组型胶原蛋白、鹿茸多肽和壳聚糖为原料制成，制备过程包括包载鹿茸多肽壳聚糖微球的制备、Ⅰ型/Ⅲ型胶原软骨修复支架的制备以及鹿茸多肽壳聚糖微球的负载步骤。本发明制备的修复支架综合了Ⅰ型胶原带状纤维结构和Ⅲ型胶原网状纤维结构特点，制备的修复支架具有适宜的三维网络结构、良好的生物相容性、无毒性、可降解性和免疫原性低的特点，并结合了鹿茸多肽对关节软骨修复作用，是一种较好的适于软骨缺损修复及治疗的医用材料。

技术领域

本发明属于生物医用技术领域，具体涉及一种负载鹿茸多肽的Ⅰ型/Ⅲ型胶原软骨修复支架及其制备方法。

背景技术

关节软骨是一种极复杂的表面光滑且富有光泽的透明样软骨结缔组织，其在关节活动中主要起负重和运动作用。关节软骨生理性的正常老化过程开始于20岁以后，随年龄增加而发展，软骨在化学成分、组织学表现、合成和退变活动等方面发生一系列改变。当软骨发生损伤后，其营养汲取受限，组织缺乏供血，会导致损伤部位病情逐渐恶化，最终可发展为膝骨性关节炎（Knee osteoarthritis，KOA），严重影响了患者的生活和健康。近年来研究表明，软骨组织工程修复技术对软骨再生及修复具有重要意义。因此，从恢复软骨损伤这一根本因素入手，通过组织工程方法，制备一种能取代自体或异体软骨移植的可诱导软骨原位再生的活性支架材料，可能是治疗软骨缺损的一种有效途径。

胶原是细胞外基质（ECM）的主要成份，其被广泛应用在软骨修复材料中。Ⅰ型胶原具有诱导软骨细胞合成Ⅱ型胶原的作用。Ⅰ型胶原还是纤维形成胶原，它的三维网状结构是其产生、分泌和储存Ⅱ型胶原蛋白以及新生软骨细胞外基质内矿物沉积的关键，其支架材料被证明能加快细胞粘附、迁移，促进软骨损伤自我修复。重组人源型胶原蛋白在结构、特性等方面与人类自身胶原蛋白高度一致，并具有良好的生物相容性、细胞黏附性，可为细胞提供充足的养分促进新细胞的形成。Ⅲ型胶原在骨髓发育中的关键作用体现在软骨和骨形成前的间充质干细胞凝聚过程，以及促进间充质干细胞分化为成骨或软骨细胞的潜能。Ⅲ型胶原在成人软骨细胞外基质中存在未加工的n-肽类胶原蛋白分子，它作为共价交联聚合物广泛地与Ⅱ型胶原交叉连接，包覆Ⅱ型胶原的表面以增加被软骨缺损削弱的Ⅱ型胶原网络结构框架。目前的研究结果已证实了其促进软骨缺损修复作用。

鹿茸多肽（PAP）具有强筋骨、益精血、提高人体免疫力、促进骨及软骨愈合等作用，其富含鹿茸胰岛素样生长因子（IGF-1）、鹿茸生长激素（HCH）、鹿茸促生长释放因子（GHRF），鹿茸神经生长因子（NGF）、鹿茸表皮生长因子（EGF）、鹿茸成纤维生长因子（FGF）等鹿茸活性肽成份。体外实验表明PAP可促进骨髓间质细胞的增殖、分化以及软骨细胞、成纤维细胞、表皮细胞的增殖和抑制凋亡、抗衰老作用。对于软骨细胞，PAP中富含的多种生长因子和其它活性成分能有效刺激软骨细胞增殖，在适宜条件下可促进BMSCs定向分化为软骨细胞，同时延缓或逆转软骨细胞的凋亡。

本发明综合天然Ⅰ型胶原和人重组Ⅲ型胶原各自在软骨缺损修复中的作用和优势，并结合鹿茸多肽对软骨修复的促进作用，制备一种可用于软骨缺损修复的修复支架。它通过释放所负载的鹿茸多肽、并协同Ⅰ型/Ⅲ型胶原共同促进软骨组织再生从而达到软骨缺损修复的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种负载鹿茸多肽的Ⅰ型/Ⅲ型胶原软骨修复支架。所制备的修复支架，具有良好的生物相容性、可降解性和免疫原性低的特点，能有效促进软骨的再生性修复，是一种较好的适用于关节软骨损伤修复的医用材料。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种负载鹿茸多肽的Ⅰ型/Ⅲ型胶原软骨修复支架的制备方法，包括如下步骤：

（1）分别将型胶原蛋白、型胶原蛋白溶于乙酸中制备成一定浓度的型胶原蛋白溶液和型胶原蛋白溶液；

（2）将步骤（1）所得的型胶原蛋白溶液和型胶原蛋白溶液混合，搅拌均匀得混合溶液；