[发明专利]用UHPLC-Q-Orbitrap MS分析酸枣仁和理枣仁差异性化学成分的方法

说明书

本发明属中药分析及中药质量控制技术领域，提供一种用UHPLC‑Q‑Orbitrap MS分析酸枣仁和理枣仁差异性化学成分的方法，酸枣仁和理枣仁药材粉末经石油醚索氏提取脱脂，70%乙醇加热回流提取，过滤后得样品溶液；样品溶液用UHPLC‑Q‑Orbitrap‑MS进行化学成分分析，质谱数据通过Compound Discover软件进行峰匹配、峰对齐、滤噪、归一化处理，得到包含化合物分子量、保留时间及峰面积的Excel表；化合物峰面积数据矩阵导入Simca‑p软件多元统计分析，结合ROC曲线，找到并鉴定出酸枣仁和理枣仁的差异性化学成分。揭示了酸枣仁和理枣仁的物质基础，为建立新型中药质量评价体系提供参考。

技术领域

本发明属于中药分析及中药质量控制技术领域，具体涉及到一种利用 UHPLC-Q-Orbitrap MS分析酸枣仁和理枣仁差异性化学成分的方法，采用高分辨质谱技术分析酸枣仁和理枣仁差异性化学成分的方法。

背景技术

酸枣仁为鼠李科枣属植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa(Bunge) Huex H.F.Chou的干燥成熟种子，理枣仁为酸枣仁同科同属植物滇刺枣Ziziphus mauritianaLam.的成熟种子，习称“滇枣仁”、“缅枣仁”或“进口酸枣仁”。两者在传统功效上兼具宁心安神、敛汗之功效。2015年版《中国药典》记载酸枣仁“甘、酸，平；归肝、胆、心经。养心补肝，宁心安神，敛汗，生津。用于虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴”。理枣仁作为云南省地方习用药材。 2005年版《云南省中药材标准》记载理枣仁“甘、平；归心、肝经”。具有“宁心安神，除烦敛汗”的功效，用于“虚烦不眠、心悸、烦躁，虚汗”等。随着生活压力的增大，失眠人数不断增多，作为治疗失眠的首选中药，酸枣仁临床使用频率高达67.3％。近年来酸枣仁市场需求量不断增大，野生资源逐渐萎缩，导致价格不断攀升，大量云南以及缅甸理枣仁涌入药材市场。由于酸枣仁和理枣仁性状特征和传统功效相似，二者价格悬殊，导致出现大量理枣仁冒充酸枣仁销售的现象，造成两者在中药材市场及临床应用较为混乱。为此，明确二者的化学差异将为建立科学的质量控制标准提供坚实的实验基础。

发明内容

本发明为了明确酸枣仁和理枣仁的化学差异，提供了一种利用 UHPLC-Q-Orbitrap MS分析酸枣仁和理枣仁差异性化学成分的方法。

本发明由如下技术方案实现的：一种利用UHPLC-Q-Orbitrap MS分析酸枣仁和理枣仁差异性化学成分的方法，酸枣仁和理枣仁药材粉末经石油醚索氏提取脱脂，采用70％乙醇加热回流提取，过滤后得样品溶液；酸枣仁和理枣仁的样品溶液进行超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱UHPLC-Q-Orbitrap-MS进行样品中化学成分分析，质谱数据通过Compound Discover软件进行峰匹配、峰对齐、滤噪、归一化等处理，得到包含化合物分子量、保留时间及峰面积的Excel表；将包含化合物峰面积的数据矩阵导入Simca-p 软件进行多元统计分析，结合ROC曲线，找到并鉴定出酸枣仁和理枣仁的差异性化学成分。

具体步骤如下：

(1)样品的制备：精密称取各批次酸枣仁样品粉末2g，置索氏提取中，加石油醚加热回流，药渣挥去溶剂，转移至圆底烧瓶，加入70％乙醇加热回流2小时，过滤，药渣用70％乙醇洗涤，合并洗液与滤液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL容量瓶中，过0.45μm滤膜，取续滤液即得供试品溶液；分别从各样品溶液中取等量溶液，混匀，置于液相小瓶中作为质量控制quality control， QC样品；

(2)液相色谱-质谱条件：