[发明专利]一种用类人体纳米微囊透皮缓释技术制备皮损修复冻干粉的方法

权利要求书

1.一种用类人体纳米微囊透皮缓释技术制备皮损修复冻干粉的方法，其特征在于，通过以下步骤制备:

(1)干细胞的原代分离和培养:临床来源新鲜人脐带，通过酶消化法获得脐带干细胞，正常培养传代；

(2)干细胞因子的获取:正常培养的脐带干细胞融合度达到80％以上时，更换新鲜的不含抗生素的无血清培养基进行培养，收集脐带干细胞培养上清液，进行超滤浓缩，即得干细胞因子溶液；

(3)干细胞因子纳米微囊的制备:将干细胞因子溶液缓慢注入搅拌状态下的磷脂溶液或者液体磷脂中，形成干细胞因子纳米微囊，均质处理后，与促渗剂混合均匀即得；

(4)干细胞因子纳米微囊的检测：用透射电镜观察纳米微囊形态，粒度分析仪检测纳米微囊的粒径分布和Zeta电位，MTT法检测纳米微囊促细胞增殖效果，划痕实验检测纳米微囊促细胞迁移效果；

(5)干细胞因子纳米微囊冻干粉的制备：以纳米微囊含有的总蛋白浓度为标准添加冻干保护剂，后续操作需要在无菌条件下进行，包括除菌过滤，对液体进行分装及冷冻干燥。得到冻干粉常温贮存备用。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述干细胞因子可源自脐带干细胞、脂肪干细胞、成纤维细胞的一种或者多种，也可以使用成分明确的生长因子，如重组人表皮生长因子、重组人血管内皮生长因子、重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组人角质细胞生长因子中的一种或者混合。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述超滤浓缩步骤，使用1kd、3kd、10kd、30kd、50kd、100kd超滤膜中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述磷脂溶液或者液体磷脂为大豆磷脂、蛋黄磷脂或者混合磷脂中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纳米微囊制备过程，干细胞因子溶液添加速度为3％～6％V/min。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述干细胞因子纳米微囊的粒径范围为50～400nm。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述促渗剂选自月桂氮酮、丙二醇、TAT、Pep-1、SPACE、Peptide、TD-1中的一种或几种。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述促渗剂占纳米微囊溶液总重量的0.1～20％。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，以纳米微囊溶液含有的总蛋白浓度为标准，添加冻干保护剂，即甘露醇、海藻糖和右旋糖酐中的一种或几种。