[发明专利]梅花参的荧光PCR检测方法及其引物和探针在审
| 申请号： | 201910947886.3 | 申请日： | 2019-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN110699461A | 公开（公告）日： | 2020-01-17 |
| 发明（设计）人： | 张晓峰;吴姗;张明哲;虞惠贞;尹文秀;张荃;孙超 | 申请（专利权）人： | 浙江省检验检疫科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 33246 浙江千克知识产权代理有限公司 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 310000 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 梅花参 探针 引物 线粒体细胞色素氧化酶亚基I 实时荧光PCR检测 物种 海参制品 物种鉴定 灵敏度 深加工 可用 真伪 鉴别 | ||
1.用于检测梅花参的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针序列包括：
TA-F:GCTCAACCAGGATCCCTTCT
TA-R:CCGGCTCCTCTTTCTACTCC
TA-P：FAM-CCTTCCCCCGAATGAACAAC-Eclipse。
2.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，还包括内参照引物和探针，其序列分别是：
18SrRNA-F：CCTGAGAAACGGCTACCAT
18SrRNA-R：CGTGTCAGGATTGGGTAAT
18SrRNA-P：FAM-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-Eclips。
3.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的使用浓度比为：TA-F:TA-R:TA-P＝1:1:1
4.一种检测梅花参的PCR鉴定方法，包括如下步骤：
(1)样本的预处理；
(2)提取经(1)处理后的样本中的DNA；
(3)利用引物TA-F和TA-R，以及探针TA-P对(2)中提取的DNA进行荧光PCR扩增；
(4)种类的确定；
其特征在于，所述引物和探针序列包括：
TA-F:GCTCAACCAGGATCCCTTCT
TA-R:CCGGCTCCTCTTTCTACTCC
TA-P：FAM-CCTTCCCCCGAATGAACAAC-Eclipse。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的荧光PCR扩增条件为：(1)95℃，10sec；(2)95℃，5sec；60℃，23sec；50个循环。
6.根据权利要求4至5之一所述的方法，其特征在于，所述的方法最终的判定条件为：Ct值小于等于43时，结果为阳性，Ct值大于43时为阴性。
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