[发明专利]一种无忧花的无菌苗诱导方法

说明书

本发明涉及无忧花培养技术领域，具体涉及一种无忧花的无菌苗诱导方法。本发明的无菌苗诱导方法采用临近成熟期自然授粉形成的胚进行胚培养从而获得无菌苗，为无忧花完整的组培快繁技术体系的建立提供了方法和依据。针对无忧花的自身特点，首先确定采种时间是关键环节。采集临近成熟期、未开裂的中国无忧花果荚，剥开果荚选取健康的种子作为消毒材料并在无菌条件下剥取幼胚进行培养，消毒成功率可达90％以上；根据无忧花组织材料容易褐化、不易诱导的特点，通过对果荚的低温处理，可以减少褐化、促进幼胚萌发；在培养基中添加抗氧化剂并对其种类选取、使用量、使用方法进行优化和改良，以获得褐化率更低、成苗率更高的组培苗。

【技术领域】

本发明涉及无忧花培养技术领域，具体涉及一种无忧花的无菌苗诱导方法。

【背景技术】

无忧花，指中国无忧花(学名：Saraca dives Pierre)，又名火焰花。为常绿乔木，枝叶浓密，花大而色红，盛开时远望如团团火焰，是一种极有园林开发应用前景的植物；然而由于无忧花数量稀少，而且无忧花雄蕊无花粉，不容易结果不容易取到种子，目前，无忧花的繁殖可采用播种、扦插和高空压条等方法，其中播种是最常用的繁殖方法。但据报道，在广州及邻近地区种植的无忧花，虽然生长良好，能够开花结果，但由于在荚果成熟期受到荔枝异形小卷蛾Cryptophlebia ombrodelta Lower严重危害，几乎连年采收不到健康种子，严重影响了中国无忧花的推广应用。在实际育苗实践中，也遇到发芽率低、种子被害虫和菌类危害严重的现象。因此，通过植物组织培养的技术可能是破解中国无忧花种苗规模化繁育的有效途径，目前尚无相关研究的文献报道。在现有技术的中国专利CN 108323425A《一种四季无忧花的扦插繁殖方法》中也提到，目前无忧花的组培繁殖仍比较困难，而且处于难实现组培繁殖的情况。

在实际的组织培养技术研究中发现，与大多数木本植物类似，利用中国无忧花茎段作为外植体，存在比较严重的褐化问题，不容易诱导无菌芽。利用中国无忧花的种子进行无菌播种，同样存在褐化现象，发芽困难。同时，由于其种子较大，长宽约为4.1cm×2.5cm，不便组培操作。而其胚胚近锥状，长0.4-0.6cm，比较容易处理。因此，结合中国无忧花在种子发育过程中容易受到病虫害侵染等情况，利用组培快繁技术进行种苗的标准化繁育非常必要。而解决外植体的消毒、无菌苗的诱导和木本植物组培过程中易于出现的褐化等问题是其中的关键环节，这对整个组培体系的建立具有至关重要的作用。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种无忧花的无菌苗诱导方法。本发明诱导方法可对无忧花进行组培，有效降低无忧花组培过程中的褐变率，提高无忧花组培苗的成苗率。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种无忧花无菌苗的诱导培养基，所述培养基包含水解酪蛋白和抗氧化剂。

进一步的，所述抗氧化剂为聚乙烯吡咯烷酮和/或改性活性炭。

进一步的，所述改性活性炭的改性方法为：将核桃壳和龙眼壳按照质量比为1:2混合，进行粉碎后过100目筛，然后浸渍于1-2mol/L的盐酸溶液或1-2mol/L的磷酸溶液中1-2h，过滤后放在明火中烘烤，直至把粉末烤黑，冷却后用1-2mol/L的氢氧化钠溶液中和洗去酸液，再采用清水漂洗后干燥得到所述改性活性炭。

进一步的，所述诱导培养基包括用于幼胚的诱导培养基I和用于从胚上分离的幼嫩茎段的诱导培养基II。

进一步的，所述诱导培养基I的含量如下：1/2MS₀+IAA 0.5-1.0mg/L+GA₃ 0.5-3.0mg/L+水解酪蛋白500mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.0-7.0g/L，pH5.8-6.2。