[发明专利]一种快速提取石蜡组织RNA的方法

权利要求书

1.一种快速提取石蜡组织RNA的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：

脱蜡混合液bufferAL：0.5～1.5％的tween-20(V/V)、5～15mM的Tris·Cl；

裂解液buffer RLT：400～600mM的Tris·Cl，15～25mM的EDTA，质量分数0.1～1％的SDS，80～120mM的DTT；

DNase I工作混合液：8～12mM的Tris·Cl、0.1Mm的CaCl₂、8～12mM的MnCl₂和DNase I0.5～7.5U/μL；

纯化液1：1～5％Chelex-100(m/v，g/ml)，溶剂为TE缓冲液；

纯化液2：4～7％Chelex-100(m/v，g/ml)，溶剂为DEPC处理水；

蛋白酶K。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的脱蜡混合液bufferAL包含体积分数1％的tween-20，10mM的Tris·Cl。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的裂解液buffer RLT包含500mM的Tris·Cl，20mM的EDTA，质量分数0.5％的SDS，100mM的DTT。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的DNase I工作混合液包含10mMTris·Cl，0.1Mm CaCl₂，10mM MnCl₂、0.5U/μLDNase I。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的纯化液1包括5％g/ml的Chelex-100，溶剂为TE缓冲液。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的纯化液2包括6％g/ml的Chelex-100，溶剂为DEPC水。

7.一种快速提取石蜡组织RNA的方法，其特征在于，是利用权利要求1、2、3、4、5或6所述的试剂盒进行提取，具体方法如下：

A、脱蜡：将FFPE样品置于脱蜡混合液bufferAL中进行脱蜡；

B、组织的裂解：将脱蜡后的样品用裂解液buffer RLT和蛋白酶K裂解，得裂解液；

C、纯化：裂解液中加入纯化液1，混匀孵育，离心取上清，将上清转入新的管中，再加入氯仿混匀，离心取上清转入新的管中，得到纯化液；

D、RNA分离：在纯化液中加入DNase I工作混合液，混匀孵育，再加入纯化液2，混匀孵育，离心取上清至无RNase离心管中，得到RNA。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：

A、脱蜡：

刮取1片10μm厚、面积约1×1cm²的FFPE样品至1.5mL离心管中，加入100μl脱蜡混合液bufferAL,将贴在管壁上的组织全部浸入其中，90℃孵育10min；

B、组织的裂解

(1)加入120μl裂解液buffer RLT，2μl Proteinase K使得其终浓度为10mg/L涡旋震荡混匀56℃孵育15min 400rpm,直至样品完全溶解.80℃孵育15min，离心，使管壁上的溶液收集到管底；

C、纯化

(1)加入100μl纯化液1,轻轻混匀，99℃450rmp孵育10min,立即放在冰上静置2min,10500xg离心15min；

(2)转移上清至新的EP管中金属浴加热至45℃后，加入100μl氯仿充分混匀后，10500xg离心15min,吸取上清180μl至新的EP管中；

D、RNA分离

(1)在步骤C的(2)的含有上清的新的EP管中加入2μl DNase I工作混合液，使用移液器吹打混匀，37孵育15min,94℃孵育5min；

(2)加入100μl纯化液2,轻轻混匀,100℃450rmp孵育15min,10500xg离心15min，转移180μl上清至新的无RNase离心管中。