[发明专利]一种快速提取石蜡组织RNA的方法

说明书

本发明公开了一种快速提取石蜡组织RNA的方法。A、脱蜡：将FFPE样品置于脱蜡混合液bufferAL中进行脱蜡；B、组织的裂解：将脱蜡后的样品用裂解液bufferRLT裂解，得裂解液；C、纯化：裂解液中加入纯化液1，混匀孵育，离心取上清，将上清转入新的管中，再加入氯仿混匀，离心取上清转入新的管中，得到纯化液；D、RNA分离：在纯化液中加入DNaseI工作混合液，混匀孵育，再加入纯化液2，混匀孵育，离心取上清至无RNase离心管中，得到RNA。本发明的方法脱蜡效率高且不会有试剂残留问题，1～3片肿瘤组织切片即可获得足够的RNA，所提取的RNA含量和纯度高，操作过程简便快捷，重复性高，且所需样本量少。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速提取石蜡组织RNA的方法。

背景技术：

福尔马林固定石蜡包埋组织(formalin fixed and paraffin embeddedtissues，FFPE，以下简称FFPE)处理方法能够较长时间地保存组织或制备检验所需的组织标本，是医疗机构最常用的保存病理组织的方法。医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，数量巨大的归档FFPE样本为回顾性研究、阐明疾病机制、发现治疗靶标和指示预后等方面提供了宝贵的资源。从归档FFPE组织中提取核酸使研究人员能够进行各种类型的下游研究，包括基于聚合酶链反应(PCR)DNA扩增的诊断和回顾性分子遗传学研究，因此从FFPE样品中分离出高纯度高质量的核酸是下游研究顺利进行的最基本前提。

然而，从FFPE组织中提取高质量核酸是困难且具有挑战性的。1)生物样本经福尔马林固定以及石蜡包埋，导致组织核酸受损，从而导致广泛的DNA和RNA片段化且不利于后续的核酸分离。2)目前常规的提取方法大多是先使用有机溶剂进行脱蜡，如二甲苯等，再进行纯化如酚氯仿抽提法，离子交换法，盐析法，硅胶柱法等；但由于脱蜡效率以及试剂残留问题，可能会对下游的实验造成干扰；且得到的DNA和RNA纯度低，难以满足下游试验的要求。但这些方法往往只能提取出其中一种核酸而浪费另一种核酸，且耗时长，需要的样本数量较多，临床上的分子生物学研究往往需要同时提取DNA和RNA，当样本有限时，则可能影响下游试验的进行。

因此临床上急需一种能够从FFPE样本中共分离DNA和RNA的试剂盒及方法，所提DNA和RNA纯度高、得率高，以保证即使在样本量有限的情况下下游试验的正常进行；并可以保证研究中使用的DNA和RNA的来源完全相同。

发明内容：

本发明的目的是提供一种快速提取石蜡组织RNA的试剂盒和方法。

本发明的快速提取石蜡组织RNA的试剂盒，包括以下组分：

脱蜡混合液buffer AL：0.5～1.5％的tween-20(V/V)、5～15mM的Tris·Cl；

裂解液buffer RLT：400～600mM的Tris·Cl，15～25mM的EDTA，质量分数0.1～1％的SDS，80～120mM的DTT；

DNase I工作混合液：8～12mM的Tris·Cl、0.1Mm的CaCl₂、8～12mM的MnCl₂和DNaseI 0.5～7.5U/μL；

纯化液1：1～5％Chelex-100(m/v，g/ml)，溶剂为TE缓冲液；

纯化液2：4～7％Chelex-100(m/v，g/ml)，溶剂为DEPC处理水；

Proteinase K。

优选地，所述的脱蜡混合液buffer AL包含体积分数1％的tween-20，10mM的Tris·Cl。

优选地，所述的裂解液buffer RLT包含500mM的Tris·Cl，20mM的EDTA，质量分数0.5％的SDS，100mM的DTT。