[发明专利]石油催化菌的筛选方法

说明书

本发明涉及一种石油催化菌的筛选方法，包括：将有机氮源、缓冲盐、表面活性剂和固体凝胶在水中混合，得到水溶液，水溶液的初始pH为6.0～8.0；将水溶液高温灭菌后与石油烃混合，得到液态培养基；将液态培养基与含石油催化菌的微生物原液混合后冷却，得到固态培养基；培养固态培养基至出现肉眼可见的菌落后，加入pH指示剂溶液，若菌落周围的固态培养基变色，则菌落为能够代谢石油并产生酸性物质的石油催化菌。本发明的筛选方法可以筛选出能够代谢石油并产生酸性物质的石油催化菌，从而可以将该石油催化菌用于催化原油中的烃类分子产生带羧酸基的脂肪酸，进而可以开启其它微生物降解石油的第一步反应。

技术领域

本发明涉及生态修复技术领域，特别是涉及一种石油催化菌的筛选方法。

背景技术

石油降解菌的筛选，传统的工作主要是以菌体在含有石油为唯一碳源的培养基中生长作为指标。

例如，发明专利CN201710003626.1提供一种石油降解菌Oil 2-3，耐碱海旋菌Thalassospira alkalitolerans CGMCC No.13079。该菌株pH耐受范围为pH值4-11，适合在海上溢油环境生存，可利用并降解海水中石油，实现海上溢油的微生物降解。

发明专利CN201110282069.4公开了一种从海水中驯化与筛选石油烃降解菌群的方法，其是向加入原油、基础培养基、微量金属液、维生素C溶液的开口玻璃瓶内加入海水进行石油烃降解菌群的富集与驯化10～12个月，然后向加入原油、基础培养基、微量金属液和维生素C溶液的锥形瓶内接入富集驯化的海水样品，在温度为10～15℃、转速为100r/min的振荡器中培养6～8天后，进行循环转接，在循环次数大于6次后即可得到高效去除溢油污染海水中石油烃的降解菌群。

发明专利CN201410757447.3公开了一种石油降解菌的筛选方法，该方法中使用的富集培养基、筛选培养基和驯化培养基是以石油作为唯一碳源的培养基，具体的是在培养基中加入石油和聚山梨酯-80。

发明专利CN201710024588.8公开了一种生物酶快速筛选高效石油降解菌株的方法，该方法是将经高通量初筛获得的具有石油降解能力的菌株进行细胞破碎制备粗酶液，将粗酶液按体积比1：(90～110)的比例加入石油降解率检测体系中反应，以石油降解率作为筛选指标，筛选菌株即为高效石油降解菌株。

可见，上述专利的重点均在于如何筛选出降解石油的微生物。但是，在自然界中还存在一类微生物，其可以催化原油中的烃类分子产生带羧酸基的脂肪酸，从而可以开启其它微生物降解石油的第一步反应，而如何筛选出此类产羧基的微生物，是一个技术难点。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种石油催化菌的筛选方法；所述筛选方法可以筛选出能够代谢石油并产生酸性物质的石油催化菌，从而可以将该石油催化菌用于催化原油中的烃类分子产生带羧酸基的脂肪酸，进而可以开启其它微生物降解石油的第一步反应。

一种石油催化菌的筛选方法，包括：

S1，将有机氮源、缓冲盐、表面活性剂和固体凝胶在水中混合，得到水溶液，所述水溶液的初始pH为6.0～8.0；

S2，将所述水溶液高温灭菌后与石油烃混合，得到液态培养基；

S3，将所述液态培养基与含石油催化菌的微生物原液混合后冷却，得到固态培养基；

S4，培养所述固态培养基至出现肉眼可见的菌落后，加入pH指示剂溶液，若所述菌落周围的固态培养基变色，则所述菌落为能够代谢石油并产生酸性物质的石油催化菌。

步骤S1中，所述有机氮源用于支持微生物生长，包括蛋白胨、酵母粉、酵母浸出粉中的一种或几种，且在水溶液中的总浓度共计为0.1g/L～10g/L。