[发明专利]一种快速检测基孔肯雅病毒的试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速检测基孔肯雅病毒的试剂盒，包括包括pH为8.8的反应液，dNTPs，BstDNA聚合酶，AMV逆转录酶，指示剂，FP、BP引物对和IF、IB引物对。本发明一种快速检测基孔肯雅病毒的试剂盒具有核酸检测的高特异性、高敏感性，同时具有反应快速、操作简单、不依赖大型仪器等特点，更适合现场筛查应用需求。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种快速检测基孔肯雅病毒的试剂盒。

背景技术

基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒(CHIKV)引起的急性传染病，以发热、皮疹及关节疼痛为主要特征，伊蚊是其主要传播媒介。1952年首次在坦桑尼亚证实了基孔肯雅热流行，1956年分离到病毒。基孔肯雅病毒(chikungunya virus)是单链正股RNA病毒，隶属于披膜病毒科(Family Togaviridae)、甲病毒属(Genus Alphavirus)，是一类小型球状的包膜病毒，直径约为69nm，其中刺突部分约为34.5nm。

基孔肯雅热主要分布于非洲、南亚和东南亚地区。在非洲主要流行的国家为坦桑尼亚、南非、津巴布韦、扎伊尔、塞内加尔、安哥拉、尼日利亚、乌干达、罗得西亚、科摩罗、毛里求斯、马达加斯加、马约特岛、塞舌尔及法属留尼旺岛等国家和地区。在亚洲有印度、斯里兰卡、缅甸、越南、泰国、老挝、柬埔寨、菲律宾和马来西亚等。2005－2007年本病在印度洋岛屿、印度和东南亚地区广泛流行，导致数百万人患病。其中，法属留尼旺岛的发病数高达27万，接近当地人口的40％；印度当年报告的疑似病例超过139万，部分地区的发病率超过45％。而我国、法国和美国等非流行国家不断发现输入性病例。凡有伊蚊存在地区，当伊蚊达到一定密度且自然条件适合时，如有CHIKV传入，就可能引起流行或暴发。

我国大多数地区拥有其主要传播媒介白纹伊蚊，一旦病原体侵入,可能暴发基孔肯雅热疫情。为防止疫情传入和扩散，需做好充分的技术储备，而快速检测是基础。基孔肯雅病毒的常规检测除分离培养外，依赖RT-PCR等基因检测方法，其检测周期较长、需要多步操作环节和多款实验室大型设备，在实际需要即时简便快速检测的工作中难以推广应用。

因此，提供一种快速检测基孔肯雅病毒的试剂盒，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种快速检测基孔肯雅病毒的试剂盒，本试剂盒利用2条引物来特异性识别目标片段的4个独立区域，利用2条加速引物促进结合速度，有核酸检测的高特异性、高敏感性，同时具有反应快速、操作简单、不依赖大型仪器等特点，更适合快速通关背景下的现场使用需求。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

根据GeneBank号：JN981133.1公开的基孔肯雅病毒特异性的E1基因序列，设计一种快速检测基孔肯雅病毒的特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列如下：

FP：5’-ACGGAGACGGGATGACGGTTT-TGGAGCCAACACTATCGCT-3’；SEQ ID NO.1；

BP：5’-ACGGAGACGGGATGACGGTT-ACGCCGGTGAAGACCTTA-3’；SEQ ID NO.2；

IF：5’-TGTACTCGCACGTGATGTAATCA-3’；SEQ ID NO.3；

IB：5’-AGAGTGCAAGGACAAAAACCTAC-3’；SEQ ID NO.4。

含有上述的特异性引物对的试剂盒。

进一步的，所述试剂盒包括pH为8.8的反应液、dNTPs、Bst DNA聚合酶、AMV逆转录酶、FP及BP引物、IF及IB引物、指示剂和封闭剂。