[发明专利]一种巨型艾美耳球虫纳米亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及巨型艾美耳球虫(E.maxima)重组蛋白亚单位疫苗EmMIC3和纳米亚单位疫苗PLGA‑EmMIC3，属于生物兽药技术领域。该纳米亚单位疫苗为用PLGA纳米材料包裹重组蛋白亚单位疫苗EmMIC3制成。经动物免疫保护性试验证实，上述重组蛋白亚单位疫苗EmMIC3和纳米亚单位疫苗PLGA‑EmMIC3均能够有效抵抗巨型艾美耳球虫感染。本发明用纳米材料PLGA包裹重组蛋白EmMIC3形成了一个全新的疫苗形式，不同于单独EmMIC3重组蛋白，二者组分不同。并且EmMIC3重组蛋白与纳米材料PLGA包被以后，其免疫保护效果得到明显的提升，保护效果从一般提升到优秀。

技术领域

本发明涉及生物兽药技术领域，涉及一种巨型艾美耳球虫纳米亚单位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的全球流行的寄生虫病。其发病率50-70％，死亡率为20-30％，严重时可达80％以上。耐过鸡的生产效率大大降低，每年造成的经济损失超过30亿美元。当前，鸡球虫病主要以药物防治为主。但随着耐药虫株不断出现，使药物预防效果明显降低，而且药物使用过程中产生的鸡球虫抗药性和抗球虫药物残留，严重影响了动物源食品安全。因此人们致力于寻找抗球虫药物的替代方法。研究发现，免疫预防可以解决药物残留问题，是控制球虫病的理想方法。当前市售的抗鸡球虫疫苗均为活疫苗，但活疫苗具有自身不足，如免疫程序和使用方法不易控制；生产量有限、成本高、难保存，难以满足现代养鸡业的需要；此外，最重要的是活疫苗存在毒力可能返强、易散毒等安全性问题和免疫效果问题。随着分子生物学领域的快速发展，新一代疫苗如亚单位疫苗诞生，并日益在畜禽疫病控制上发挥重要作用。亚单位疫苗只含有病原体的一种产生保护性免疫应答所必需的免疫原蛋白成分，具有不能在鸡体内复制、对鸡无致病性、不散毒等特点。将亚单位疫苗接种鸡后，可使鸡在获得抗性的同时增强机体抵抗球虫感染的能力，而且亚单位疫苗具有安全、性质稳定，方便运输，生产成本低等优点。因此，亚单位疫苗极具研究意义。但目前商品化的亚单位疫苗极少。

近年来，纳米技术的发展使设计不同成分、大小、形状和表面特征的纳米颗粒成为可能，也为纳米颗粒应用于医学领域创造机会。由于纳米颗粒大小与细胞成分相似，故能通过细胞内吞机制，尤其是胞饮作用进入活细胞。纳米颗粒作为疫苗载体运输工具和免疫增强剂被广泛应用，不仅能够提高抗原的稳定性、增强抗原的递呈和免疫原性，同时也能够靶向性递呈抗原和缓慢释放。事实上，纳米颗粒正在改变疾病的诊断，以及为疾病预防和治疗提供生物活性物质。聚乙丙交酯(PLGA)具有良好的生物相容性和生物降解性，是美国FDA和欧洲药物管理局批准用于临床治疗的纳米材料，已经在HIV DNA疫苗中显示出了良好的免疫增强效果。目前未见PLGA纳米亚单位疫苗在鸡球虫的应用研究报道。

国际上公认的鸡球虫病病原体有7种，分别为柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、布氏艾美耳球虫(E.brunetti)，早熟艾美耳球虫(E.praecox)和和缓艾美耳球虫(E.mitis)。其中巨型艾美耳球虫(E.maxima)为分布最广泛危害最严重的虫种之一。已有研究报道E.tenella微线蛋白3(EtMIC3)是决定E.tenella寄生于盲肠的关键分子，然而决定E.maxima寄生部位的关键分子尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供能够预防E.maxima鸡球虫感染的纳米亚单位疫苗PLGA-EmMIC3。

本发明的另一目的是提供该纳米亚单位疫苗的制备方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种巨型艾美耳球虫(E.maxima)纳米亚单位疫苗，所述的巨型艾美耳球虫纳米亚单位疫苗是由PLGA包裹重组蛋白EmMIC3形成的纳米粒子，所述的重组蛋白EmMIC3为巨型艾美耳球虫微线蛋白3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。