[发明专利]一种稳定高效的猪冻精试剂

权利要求书

1.一种稳定高效的猪冻精试剂，其特征在于所述猪冻精试剂为一种提高保存质量和效果的猪冷冻精液保存试剂盒，所述猪冷冻精液保存试剂盒中包括预稀释剂、冷冻稀释剂I、冷冻稀释剂II；

其中，预稀释剂成分，以1L体系计，为Tris25～35g，柠檬酸11～8g，葡萄糖8～15g，半胱氨酸3～8mM；

冷冻稀释剂I的配制方式为：将22～30g葡萄糖，柠檬酸2.5～4.5g，柠檬酸钠4～8g，hepes钠2～3.2g，Tris4～7g，EDTA-Na₂1.5～4g，碳酸氢钠0.5～2g，半胱氨酸0.01～0.2g溶于1L纯水，加入250ml蛋黄即成；

冷冻稀释剂II的配制方式为：取265-280ml冷冻稀释剂I液，加入15～30ml甘油，0.1％～0.4％质量分数的SDS，混匀，即成300mlII液；所述试剂盒中还包括解冻稀释剂，

解冻稀释剂的配制方式为：将22～30g葡萄糖，柠檬酸2.5～4.5g，柠檬酸钠4～8g，hepes钠2～3.2g，Tris4～7g，EDTA-Na₂1.5～4g，碳酸氢钠0.5～2g，半胱氨酸0.01～0.2g，茶碱0.2～4g，溶于1L纯水。

2.一种利用权利要求1所述的猪冷冻精液保存试剂盒进行猪精液冷冻保存的方法，所述方法的具体步骤为：

1)、将预稀释剂一份溶于1L水，35℃预热备用；

2)、采精一份，要求原精活率90％以上，活力80％以上，称重，并测量精子密度；根据精液重量进行1∶1稀释；混匀后室温静置1h后转入17℃恒温箱平衡2-3h；

3)、17℃平衡后，环境温度控制在17℃，并在17℃条件下用大容量离心机离心，800-900g，离心10-15min，去掉上清液，用17℃预冷的I液稀释至20亿/ml；

4)、将稀释后的精液置盛有适量17℃水的烧杯中，再将烧杯置4℃冰箱平衡3-4h，加入4℃预冷的II液1∶1稀释，混匀；

5)、在4℃条件下将最终稀释好的精液灌装至0.5ml细管中并封口；灌装后的细管在码架上码好；

6)、用程序冷冻仪冷冻码好的细管，冷冻程序4-1℃，-1.5℃/min；1至-140℃，-30℃/min；-140℃，5min。

3.如权利要求2所述的猪精液冷冻保存的方法，进一步包括对其进行猪精液解冻的步骤，所述步骤为：

取出保存在液氮中的一支细管，在50℃水浴解冻15-16s，擦净细管外的水，剪开细管两端，使精液流入4ml离心管，加入30℃预热的解冻液，30℃孵育15-20min后观察活力。