[发明专利]一种稳定高效的猪冻精试剂

说明书

本发明提供一种稳定高效的猪冻精试剂，更有选的提供一种提高保存质量和效果的猪冷冻精液保存试剂盒，所述猪精液保存试剂盒中包括预稀释剂、冷冻稀释剂I、冷冻稀释剂I I和解冻稀释剂。本发明可以使精液得到长期保存，有效提高了公猪的利用率，降低活体保种的成本，防止优良基因的漂变和传染病的发生，利于深入开展猪的联合育种工作，获得更大的遗传进展，在保护地方优良品种与加快品种改良等方面具有重要的研究价值和广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于家畜人工授精的改良技术领域，涉及一种可有效提高猪精液冷冻保存的质量和效果的猪精液保存试剂盒。

背景技术

自从英国生物学家Polge等用甘油作为防冻剂冷冻保存精子以来，应用冷冻精子进行体外受精和人工授精被广泛应用于人类不育不孕症的治疗和家畜动物的繁殖育种。依据现代生殖生物理论，一个雄性动物的精子可以获得成千上万个后代个体，因此，高效保存动物精子能显著降低保养活体动物个体和种群的高额负担，缩短繁殖周期，提高生产效率。养猪业是畜牧业的重要组成部分，猪的常温液态保存精液技术已经被大面积地推广和应用到养猪生产实践中。精液冷冻保存是人工授精的一项重大变革，不但解决了精液长期保存的问题，有利于本地猪种资源保护，还使精液不受时间、地域的限制，便于开展省际、国际之间的协作，提高优良种猪的利用率；而且极大地延长了种猪基因物质的使用寿命，使优良种猪在短期进行后裔测定，保留和恢复精液供应、血统更新、引种、降低生产成本等方面均有重要意义。随着全国性、区域性种猪联合育种工作的深入开展，猪的冷冻精液技术研究越来越显得迫切。但目前在国内外养猪生产中，存在的主要问题之一是猪冷冻精液生产技术水平较低，受胎率普遍不高，严重制约着猪品种改良和肉品质量的提高。

精液冷冻保存是指将精液经过特殊处理后置于液氮(-196℃)或干冰(-79℃)中，使得精子的代谢活动状态暂时停止，从而可达到长时间保存该物种种质资源，切实发挥良种公畜的遗传资源的目的。该技术可以大大提高优良公畜的利用率，减少饲养量，节约成本，可直接帮助农牧民增产增收。同时还可以缓解目前国内人畜争粮问题，减少温室气体排放，降低由于退耕还草引起的种植业生产压力。该技术使得优良基因不受时间、地域的限制，是一种能把优秀的遗传资源广泛传播的有效手段。

虽然猪精液冷冻技术在家畜育种以及种质资源保存等方面都有重要意义，但是猪的精液冷冻保存技术目前很难推广应用，主要是由于家畜精子本身对温度变化特别敏感，在冷冻过程中极易损伤，从而使猪冷冻精液生产难度系数加大，解冻后精子复苏率低，导致母猪的受胎率低、窝产仔数少。该技术难题严重制约着家猪品种的改良和育种进程。现有的猪冻精技术大多解冻活力不高，能达到60％以上的极少，限制了猪冻精的推广使用。在试剂方面，这些技术只关注冷冻液，而对预稀释和解冻过程的关注不足，而实际上猪精液在不同生产阶段所面临的环境并不一样，所需要的最佳稀释液不完全一致。

发明内容

本发明要解决的技术问题是猪精液冷冻-解冻后精子活率低。本发明的目的是针对现有问题与不足，提供一种能有效延长家猪精子超低温冷冻保存存活效率以及有利于维持精子顶体完整性的猪精液保存试剂盒；

所述猪精液保存试剂盒中包括预稀释剂、冷冻稀释剂I、冷冻稀释剂II和解冻稀释剂；

其中，预稀释剂成分(1L体系)为Tris25～35g，柠檬酸11～8g，葡萄糖8～15g，半胱氨酸3～8mM；

冷冻稀释剂I的配制方式为：将22～30g葡萄糖，柠檬酸2.5～4.5g，柠檬酸钠4～8g，hepes钠2～3.2g，Tris4～7g，EDTA-Na2 1.5～4g，碳酸氢钠0.5～2g，半胱氨酸0.01～0.2g溶于1L纯水，加入250ml蛋黄即成；

冷冻稀释剂II的配制方式为：取265-280ml冷冻稀释剂I液，加入15～30ml甘油，0.1％～0.4％质量分数的SDS，混匀，即成；