[发明专利]一种从食用菌中分离纯化脑苷脂B的方法

权利要求书

1.一种从新鲜香菇中分离纯化脑苷脂B的方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

S1，将所述新鲜香菇原料烘干至含水量低于10％，烘干温度为50-70℃，然后粉碎过200目筛，得到干食用菌粉；

S2，按液料比向所述干食用菌粉中加入含有醚类溶剂和醇类溶剂的提取液，磁力搅拌后进行提取操作，然后静置过滤，提取到脑苷脂B粗品；所述醚类溶剂为乙醚、丙醚、正丁醚、叔丁基甲醚或叔丁基乙醚的一种，所述醇类溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或叔丁醇的一种；

S3，将所述脑苷脂B粗品减压蒸馏蒸干后用烷烃类溶剂复溶，进行离心处理，离心转数为4000-12000r/min，时长为15min，将处理后得到的上清取出；所述烷烃类溶剂为正戊烷、异戊烷、正己烷、3-甲基戊烷或2，3-二甲基丁烷的一种；

S4，使用正相固相萃取柱对所述上清进行纯化，待固相萃取柱上样后，依次使用烷烃类溶剂、所述醚类溶剂、酮类溶剂洗脱，其中脑苷脂B富集于酮类溶剂洗脱液，纯度为20％-60％；所述正相固相萃取柱为Si-SPE、NH₂-SPE或CN-SPE的一种；所述酮类溶剂为丙酮、丁酮、或甲基异戊酮的一种；

S5，将所述洗脱液减压蒸馏蒸干后用甲醇复溶，使用反相半制备型高效液相，设定纯化参数，按照液相方法进一步纯化所述洗脱液，最终得到纯度为99％以上的脑苷脂B，纯化使用的流动相为A、B、C；所述流动相A为体积比为1:2～6的醚类溶剂、醇类溶剂与0.1％甲酸混合的混合液，所述流动相B为乙腈，所述流动相C为水；所述反相半制备型高效液相的色谱柱填料为C-18、C-30或NH2的一种。

2.如权利要求1所述的从新鲜香菇中分离纯化脑苷脂B的方法，其特征在于，所述提取操作的提取温度为50℃-70℃，提取时长为10-20h。

3.如权利要求1所述的从新鲜香菇中分离纯化脑苷脂B的方法，其特征在于，所述提取液的醚类溶剂与醇类溶剂的体积比为1～5：1，所述液料比为1:5～20。

4.如权利要求1所述的从新鲜香菇中分离纯化脑苷脂B的方法，其特征在于，所述纯化参数：流速为2～5ml/min，柱温为35～55℃，检测波长为210nm。

5.如权利要求1所述的从新鲜香菇中分离纯化脑苷脂B的方法，其特征在于，所述液相方法为：从开始到第3分钟，使用35％的所述流动相B和20％的所述流动相C；从第3分钟到第10分钟，使用35％-50％的所述流动相B和20％-5％的所述流动相C；从第10分钟到第15分钟，使用50％-55％的所述流动相B和5％-0％的所述流动相C；从第15分钟到第35分钟，使用55％的所述流动相B和0％所述流动相C。