[发明专利]一种从食用菌中分离纯化脑苷脂B的方法

说明书

本发明公开了一种从食用菌中分离纯化脑苷脂B的方法，属于分离纯化技术领域，包括：S1，将食用菌原料烘干然后粉碎过筛，得到干食用菌粉。S2，向所述干食用菌粉中加入提取液，然后静置过滤，提取到脑苷脂B粗品；S3，将所述脑苷脂B粗品用烷烃类溶剂复溶，进行离心处理，将处理后得到的上清取出；S4，使用正相固相萃取柱对所述上清进行纯化，待固相萃取柱上样后，依次使用烷烃类溶剂、所述醚类溶剂、酮类溶剂洗脱；S5，将所述洗脱液使用反相半制备型高效液相，设定纯化参数，按照液相方法进一步纯化所述洗脱液，最终得到纯度为99％以上的脑苷脂B。本发明建立了一种从食用菌中分离纯化脑苷脂B的方法，处理方法简单、重现性好。

技术领域

本发明属于分离纯化技术领域，涉及一种从食用菌中分离纯化脑苷脂B的方法。

背景技术

脑苷脂由单糖、酰胺连接脂肪酸和类鞘脂碱组成的一种物质，其广泛存在于植物、动物大脑、肌肉和食用菌中，具有较强的生理活性，其中一些具有抗动脉硬化、抗神经变性和抗动脉粥样硬化的作用。

目前，脑苷脂的研究主要集中在海参等海洋生物中，成本较高，这大大限制了相关研究进展。而食用菌的价格低很多，以香菇为例，是原产于中国的一种食用菌，年产量130万吨。它是中国重要的出口商品之一，也是世界第二大类食用菌，富含多种氨基酸、矿物质元素及功能性成分，对人体有较高的生理活性。因此，食用菌也可成为低成本制取脑苷脂的原料，促进科研、医药等相关领域的发展。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明针对上述现有技术上的不足，提供一种从食用菌中分离纯化脑苷脂B的方法，本发明处理方法简单、重现性好，适合于科研和医药等相关行业。

为实现上述目的，本发明公开了一种从食用菌中分离纯化脑苷脂B的方法，包括如下制备步骤：

S1，将食用菌原料烘干至含水量低于10％，烘干温度为50-70℃，然后粉碎过200目筛，得到干食用菌粉。

S2，按液料比向所述干食用菌粉中加入含有醚类溶剂和醇类溶剂的提取液，磁力搅拌后进行提取操作，然后静置过滤，提取到脑苷脂B粗品；

S3，将所述脑苷脂B粗品减压蒸馏蒸干后用烷烃类溶剂复溶，进行离心处理，离心转数为4000-12000r/min，时长为15min，将处理后得到的上清取出；

S4，使用正相固相萃取柱对所述上清进行纯化，待固相萃取柱上样后，依次使用烷烃类溶剂、所述醚类溶剂、酮类溶剂洗脱，其中脑苷脂B富集于酮类溶剂洗脱液，纯度为20％-60％；

S5，将所述洗脱液减压蒸馏蒸干后用甲醇复溶，使用反相半制备型高效液相，设定纯化参数，按照液相方法进一步纯化所述洗脱液，最终得到纯度为99％以上的脑苷脂B，纯化使用的流动相为A、B、C。

进一步地，所述提取操作的提取温度为50℃-70℃，提取时长为10-20h。

进一步地，所述提取液的醚类溶剂与醇类溶剂的体积比为1～5：1，所述液料比为1:5～20。

进一步地，所述食用菌原料为香菇、猴头菇、金针菇、杏鲍菇的一种。

进一步地，所述醚类溶剂为乙醚、丙醚、正丁醚、叔丁基甲醚或叔丁基乙醚的一种，所述醇类溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或叔丁醇的一种，所述烷烃类溶剂为正戊烷、异戊烷、正己烷、3-甲基戊烷或2，3-二甲基丁烷的一种，所述酮类溶剂为丙酮、丁酮、或甲基异戊酮的一种。

进一步地，所述正相固相萃取柱为Si-SPE、NH₂-SPE或CN-SPE的一种。

进一步地，所述反相半制备型高效液相的色谱柱填料为C-18、C-30或NH2的一种。

进一步地，所述纯化参数：流速为2～5ml/min，柱温为35～55℃，检测波长为210nm。