[发明专利]用于检测鸡传染性贫血病毒的引物对、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种用于检测鸡传染性贫血病毒的引物对、试剂盒和方法。该引物对包括SEQ ID NO.1所示的CIAV‑F70和SEQ ID NO.2所示的CIAV‑R70，该试剂盒包括上述的引物对、阳性标准质粒、实时荧光定量PCR试剂和ddH₂O，该方法以待测样品为模板，使用该引物对进行荧光PCR扩增后根据标准曲线即可得到待测样品中鸡传染性贫血病毒的含量，实现检测的目的。本发明设计了一种针对CIAV的引物对，结合荧光PCR定量法能够快速检测CIAV，并提出了应用了该引物对的试剂盒，本发明提出的试剂盒和检测方法准确度高、灵敏度高、特异型好且重复性好，能够应用在CIAV的研究和防疫领域。

技术领域

本发明涉及鸡传染性贫血病毒(CIAV)的检测技术领域，具体涉及用于检测鸡传染性贫血病毒的引物对、试剂盒和方法。

背景技术

鸡传染性贫血病毒(CIAV)是一种类型独特的环状单链(负链)DNA病毒，根据CIAV病毒粒子大小及其核酸特征，1995年第六次国际病毒分类委员会(interenationalcommitteeon taxonomy of virus,ICTV)在维也纳会议报告中将CIAV归于圆环病毒科，圆环病毒属(circovims)，与猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)和鹦鹉鸟曝羽病病毒(psittacine beak and feather disease virus,PBFDV)同属一科。由于CIAV与其它两种病毒在基因组及抗原结构方面存在一定差异，1999年ICTV在第八次病毒分类报告中，CIAV新增一个新属，环形病毒属(gyrovirus)，CIAV被单独归于新的环形病毒属中，目前，CIAV是该属的唯一成员。CIAV可通过水平和垂直传播，所有天龄的鸡均易感。

目前对于鸡传染性贫血的诊断方法主要是使用常规PCR检测，常规PCR是分子水平上检测的最原始的技术，该技术具有一定准确性，但其灵敏性明显不足且重复性不好。因此，提出一种快速检测CIAV的方法、试剂盒以及配套的引物对十分具有意义。

发明内容

本发明的目的在于提出一种用于检测鸡传染性贫血病毒的引物对、试剂盒和方法，具有准确度高、灵敏度高和重复性好的特点。

为了实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：

一种用于检测鸡传染性贫血病毒的引物对，包括SEQ ID NO.1所示的CIAV-F70和SEQ ID NO.2所示的CIAV-R70。

本发明还提供了一种用于检测鸡传染性贫血病毒的试剂盒，试剂盒包括：上述的引物对(CIAV-F70和CIAV-R70)、阳性标准质粒、SYBR Green Premix Pro Taq实时荧光定量PCR试剂和ddH₂O；所述阳性标准质粒是由SEQ ID NO.3所示的DNA片段与pMD18-T载体相连接后得到的重组质粒。

本发明还提供了一种用于检测鸡传染性贫血病毒的方法，具体过程为：以待测样品为模板，用上述的引物对进行实时荧光定量PCR扩增，得到待测样品的循环阈值，再代入标准曲线得到待测样品的鸡传染性贫血病毒的含量；所述标准曲线为Y＝-3.334lgX+39.08，其中Y为循环阈值，X为质粒的拷贝数。所述标准曲线是由10⁷、10⁶、10⁵、10⁴和10³copies/uL这5个梯度浓度的阳性质粒作为模板，用上述的引物对(CIAV-F70和CIAV-R70)进行实时荧光定量PCR扩增制得。根据标准曲线可知，当其Ct值(循环阈值)小于35、溶解曲线出现单一峰值且T_m(PCR产物打开双链的温度)值为80.5～81.5℃时，则判定待测样品为阳性，其余情况则判定待测样品为阴性。