[发明专利]一种脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法在审
| 申请号： | 201910965551.4 | 申请日： | 2019-10-03 |
| 公开（公告）号： | CN110819711A | 公开（公告）日： | 2020-02-21 |
| 发明（设计）人： | 杨建凯;孙国柱;扈玉华;焦保华 | 申请（专利权）人： | 河北医科大学第二医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 050000 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胶质 瘤外泌 体内 编码 rna 用于 诊断 预后 应用 方法 | ||
1.一种脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其特征在于，其具体方法如下：
(1)临床获取患者的脑胶质瘤细胞培养用于提取其内外泌体，将脑胶质瘤细胞采用细胞分散剂分散，并且采用振荡设备将细胞分散均一，然后采用平板法测定细胞含量；
(2)将分散均匀的脑胶质瘤细胞采用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基培养，并供应新鲜的空气；
(3)分离提取脑胶质瘤细胞外泌体，用紫外分光光度计对患者的肿瘤细胞来源外泌体进行定量；
(4)将上述步骤中分离提取脑胶质瘤细胞外泌体后剩下的上清液采用荧光定量PCR方法测量FAM83H-AS1、XIST、MALAT1、UCA1的含量。
2.根据权利要求1所述的脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其特征在于，所述步骤(1)中细胞分散剂的原料包括离子螯合剂、胶原酶和胰蛋白酶。
3.根据权利要求2所述的脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其特征在于，所述离子螯合剂浓度为0.02-0.04％、胶原酶浓度为0.1-0.3％和胰蛋白酶浓度为0.2-0.4％。
4.根据权利要求1所述的脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其特征在于，所述步骤(2)中，向培养基按重量百分数计加入以下组份的混合物：脂联素5-15％、TGF-β 130-50％、IGF-1 10-30％、LIF 20-40％。
5.根据权利要求1所述的脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其特征在于，所述步骤(2)中的培养时间80-100个小时，培养条件为37℃，5％CO2湿润培养。
6.根据权利要求1所述的脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其特征在于，所述步骤(3)中脑胶质瘤细胞外泌体，具体提取方法如下：
a、混合液经1600-1800r/min离心18-20min后，再经0.22μm乙酸纤维素膜过滤，去除细胞碎片，得到无细胞滤液；
b、将上清转移至另一干净的灭菌管中，加入适量的ExoQuick试剂，上下颠倒离心管，混匀，3-5℃孵育过夜10-12h，1500-1600r/min离心28-30min，管底可见沉淀，去除上清液备用，1500-1600r/min继续离心6-8min，小心去除上层液体组分备用；用100μ Lbuffer重悬沉淀；
c、用紫外分光光度计对患者的肿瘤细胞来源外泌体进行定量。
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