[发明专利]一种脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法

说明书

本发明公开了一种脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其具体方法如下：(1)临床获取患者的脑胶质瘤细胞培养用于提取其内外泌体；(2)将分散均匀的脑胶质瘤细胞采用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基培养；(3)分离提取脑胶质瘤细胞外泌体，用紫外分光光度计对患者的肿瘤细胞来源外泌体进行定量；(4)将上述步骤中分离提取的脑胶质瘤细胞外泌体采用荧光定量PCR方法测量FAM83H‑AS1、XIST、MALAT1、UCA1的含量。本发明通过外部培育从患者身体中获取的脑胶质瘤细胞进行体外培养，并对培养后的细胞进行外泌体分离和长链RNA含量的检测，即通过测定外泌体分泌量，以及相应的FAM83H‑AS1、XIST等含量作为诊断预后重要的判断之一。

技术领域

本发明涉及一种诊断预后的方法，具体是一种脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法。

背景技术

脑胶质瘤是中枢神经常见的肿瘤，发病率约为3-5/10万人。组织学分四级：I级、II级呈低恶性度，具有良性生物学特性；III级和IV级为高级别胶质瘤，特别是胶质母细胞瘤，其中位生存期仅为12-18个月，间变胶质瘤(WHO III级)的中位生存期为2-5年，低级别胶质瘤(WHO I、II级)的中位生存期也仅为4-10年。

虽然目前神经外科手术技巧在不断进步，手术仪器越来越先进，结合放、化疗也取得了新的进展，另外还有一些新的治疗方法，如免疫治疗、以EGFR、IGFR、PDGFR等为靶点的靶向治疗和抗血管生成的治疗方法，这些方法通常根据患者的实际情况进行联合应用。但胶质瘤的5年生存率并没有得到明显提高，其主要原因是脑胶质瘤的高复发性和异质性以及脑胶质瘤患者在化疗过程中出现耐药现象，这严重的影响了脑胶质瘤的治疗效果。

而目前已知细胞间通过外泌体实现通讯，同时包含长链非编码RNA(lncRNA)；其中促癌lncRNA现已发现：与正常脑组织相比，多种lncRNA在胶质瘤表达上升，促进胶质瘤的形成、增殖、迁移、侵袭，发挥促癌的作用，使胶质瘤病人的预后变差，如FAM83H-AS1、XIST、MALAT1、UCA1等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种脑胶质瘤外泌体内非编码RNA用于诊断预后的应用方法，其具体方法如下：

(1)临床获取患者的脑胶质瘤细胞培养用于提取其内外泌体，将脑胶质瘤细胞采用细胞分散剂分散，并且采用振荡设备将细胞分散均一，然后采用平板法测定细胞含量；

(2)将分散均匀的脑胶质瘤细胞采用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基培养，并供应新鲜的空气；

(3)分离提取脑胶质瘤细胞外泌体，用紫外分光光度计对患者的肿瘤细胞来源外泌体进行定量；

(4)将上述步骤中分离提的取脑胶质瘤细胞外泌体采用荧光定量PCR方法测量FAM83H-AS1、XIST、MALAT1、UCA1的含量。

作为本发明进一步的方案：所述步骤(1)中细胞分散剂的原料包括离子螯合剂、胶原酶和胰蛋白酶。

作为本发明进一步的方案：所述离子螯合剂浓度为0.02-0.04％、胶原酶浓度为0.1-0.3％和胰蛋白酶浓度为0.2-0.4％。

作为本发明进一步的方案：所述步骤(2)中，向培养基按重量百分数计加入以下组份的混合物：脂联素5-15％、TGF-β1 30-50％、IGF-1 10-30％、LIF 20-40％。

作为本发明进一步的方案：所述步骤(2)中的培养时间80-100个小时，培养条件为37℃，5％CO₂湿润培养。