[发明专利]一种用于根结线虫生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的制备及应用

权利要求书

1.一种甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂，甲基营养型芽孢杆菌LW-6来源于保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No .6793，所述甲基营养型芽孢杆菌LW-6对抗逆性强，其芽孢具有抗高温耐干旱、生长繁殖快，具有定值和竞争能力强，杀线虫效果明显等特点，且对人畜无毒及对环境友好。

2.一种权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌剂，其特征在于是以所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6原种斜面经平板活化培养、种子培养、放大、超滤浓缩、低温干燥、剂型加工制备得到的LW-6菌剂。

3.一种权利要求2所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌剂的制备方法，其特征在于包括平板活化培养、种子培养、发酵和液体菌剂制备步骤，具体包括：

（1）平板活化培养：将甲基营养型芽孢杆菌LW-6原种斜面接种到平板培养基上活化，在温度为32℃下培养80h，得活化的平板菌落；

（2）种子培养：将活化的平板菌种接种到液体培养基中，在温度为32℃下培养80h，得发酵种子液；

（3）发酵：将发酵种子液按发酵培养基体积8%的量接种入发酵罐，在32℃下培养 80h，搅拌速度为180rpm，通气量11%，在检测到活孢子数≥50亿活孢子/ml的时候，停止发酵，即得到甲基营养型芽孢杆菌LW-6发酵菌液；

（4）将发酵液进行超滤浓缩，去掉42%水分；

（5）菌剂制备：在发酵液中添加7%的轻钙载体充分混匀，然后进行低温干燥；

(6)剂型加工；将上述低温干燥菌粉加入表面活性剂、助剂后即达到本发明的目标菌剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于（1）步骤中所述的平板培养基的成分及其重量百分比为：蛋白胨 3.5%，酵母浸膏 1.3%，NaCl 1.5%，琼脂粉 5.7%，葡萄糖 0.9%，碳酸钠 0.1%，硫酸镁 0.1%，硫酸铁 0.1%，余量为水，PH为7.2～7.3。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于（2）步骤中所述的液体培养基的成分及其重量百分比为：蛋白胨3.5%，酵母浸膏1.4%，NaCl 1.8%，葡萄糖00.9%，碳酸钠 0.1%，硫酸镁 0.1%，硫酸铁 0.1%，余量为水，PH为7.2～7.3，

余量为水，ph为7.2～7.3。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于（3）步骤中所述的发酵培养基的成分及其重量百分比为：豆饼粉2.4%，可溶性淀粉2.3%，酵母浸膏1.8%，葡萄糖0.9%,NaCNO30.05%、CaCO3 0.28%，碳酸钠 0.1%，硫酸镁 0.1%，硫酸铁 0.1%，余量为水，PH为7.2～7.3。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的发酵液进行超滤浓缩,去掉42%水分，其特征为：：使用孔径分别为0.004um、0.001um和1nm的3个超滤膜组件，将发酵液在37℃、压力0.3MPa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间3h, 得到甲基营养型芽孢杆菌LW-6液体菌剂,活孢子数≥50亿/ml。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤（5）中所述发酵浓缩液中, 加入7%的轻钙载体充分混匀，然后进行低温干燥,低温干燥设置用于放置浓缩菌液的区间4个，区间内设置有温度传感器、加热装置和风循环装置，加热装置内设置有临界温度和最高加热温度；将需要干燥的浓缩菌液放置在区间内，启动加热装置和风循环装置，对区间里的菌液加热，当温度传感器监控到区间内的温度降低到常温后，取出完成干燥的菌粉；其中，所述的临界温度的范围为39℃，最高加热温度为43℃。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤（6）中所述剂型加工，其特征为；加入表面活性剂十二烷基苯磺酸钠3.2%、其他助剂为 3.3%膨润土、1.8%的壳聚糖，1.2%的几丁质中的一种，余量为制备的目标菌粉，加入量均为体积比。

10.一种权利要求2所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的应用，其特征在于所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂结合现代滴灌技术用于防治烟草根结线虫病以及烟草促生中的应用。