[发明专利]一种用于根结线虫生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的制备及应用

说明书

本发明公开了一种用于根结线虫生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW‑6菌剂的制备及应用。所述甲基营养型芽孢杆菌LW‑6对抗逆性强，抗高温耐干旱生长繁殖快，具有定值和竞争能力强，杀线虫效果明显等特点，且对人畜无毒及对环境友好。本发明甲基营养型芽孢杆菌LW‑6的活孢子和次生代谢产物具有防治烟草根结线虫以及烟草促生的功能，用滴灌处理防治根结线虫效率可达70.79%，且对根结线虫幼虫的杀虫率可达93%。所述的甲基营养型芽孢杆菌LW‑6经平板活化培养、种子培养和发酵制备得到的液体菌剂活孢子数可到50亿/ml，制备步骤包括优选平板培养、特定种子培养、优选发酵、超滤浓缩、低温干燥、剂型加工制备。

技术领域

本发明涉及一种用于根结线虫生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的制备及应用，属于微生物技术领域或者生物防治技术领域。

背景技术

烟草是重要的经济作物，其生长过程受到很多病害的危害，其中烟草根结线虫病为主要的土传病害，造成烟草的减产或绝收。根结线虫(Meloidogyne spp.)是一类植物内寄生线虫，无严格的宿主特异性，能侵染多种农作物，严重危害农业生产，每年造成全球数千元亿美元的损失。根结线虫在全世界广泛分布，寄主范围广泛，它除直接危害外，还能传播细菌和真菌病害，造成许多经济作物的更大损失。在我国，随着烟草连载面积的扩大以及连作时间的延长，土壤传播的根结线虫病危害日趋严重，成为烟草生产的主要限制因素之一，导致烟叶减产和烟叶质量降低。根结线虫病的防治目前多采用化学防治、轮作及抗病品种，但效果均不太理想，且存在诸多弊端。如目前使用的化学杀线虫剂多为剧毒或高毒、高残留农药，对土壤微生物、植物、水源和大气层带来严重污染或破坏，同时病菌和线虫抗药性问题也日益突出，而且药物在植物体内残留会间接对人类造成危害。因此急需开发对环境友好，对人畜无毒的防治线虫病害的有益微生物菌剂。

本发明利用现代生物工程、发酵工程技术，用优选的培养基、发酵液配方及工艺制备而成，本发明弥补上述技术空缺，以根结线虫生物防治和提高烟草作物的产量为目的一种甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的制备及应用，本发明所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂是一种高效绿色的生防菌剂，具有防治烟草根结线虫以及烟草促生的功效。本发明甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂，是以所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6经优选平板培养、特定种子培养、优选发酵、超滤浓缩、低温干燥、剂型加工制备得到的LW-6菌剂，活孢子数可达50亿/ml，且本发明所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6对抗逆性强，生长繁殖快，具有定值和竞争能力强，杀线虫效果明显等特点，对人畜无毒及对环境友好，而且和现代的滴灌技术相结合，具有使用简单的特点。因此，本发明在新的生物农药研发方面和应用方面都具有重要的理论和实践意义。

发明内容

第一目的在于提供所述的用于烟草根结线虫生物防治和促生的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂及其使用技术；第二目的在于提供所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的制备方法。

甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌株的获得：

甲基营养型芽孢杆菌LW-6(Bacillus methylotrophilus)，保藏单位为： CGMCC—中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所；保藏编号为：CGMCC NO.6793；保存时间：2012 年11月07日，且检测结果为存活。

本发明的第一目的和第二目的是这样实现的，

所述甲基营养型芽孢杆菌LW-6对抗逆性强、生长繁殖快、抗高温耐干旱，具有定值和竞争能力强，杀线虫效果明显。

本发明的第二目的是这样实现的，是以所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6经优选平板培养、特定种子培养、优选发酵、超滤浓缩、低温干燥、剂型加工制备得到的LW-6菌剂，活孢子数可达50亿/ml，具体包括：