[发明专利]一种基于抗肝癌生物活性的复方木鸡颗粒质量控制与评价方法

权利要求书

1.一种基于抗肝癌生物活性的复方木鸡颗粒质量控制与评价方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）对照品溶液的制备

取紫杉醇/乙醇溶液溶于DMEM完全培养液，配制成含紫杉醇培养液，微孔过滤，得对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备

取复方木鸡颗粒加入到50%乙醇中，超声处理后冷却，过滤并挥干溶剂，得浸膏，计算出膏率；取浸膏溶于DMEM完全培养液，配制成含药培养液，微孔过滤，得供试品溶液；

（3）抑制率的测定

取96孔板，设置调零组、空白组和给药组，调零组给予培养液，空白组和给药组给予HepG 2细胞悬液培养，调零组和空白组给予培养液，给药组给予含药培养液培养，每孔加入10%CCK-8溶液避光培养，测定吸光度（OD值），计算抑制率；

（4）数据处理及活性计算

根据对照品和供试品的给药浓度及抑制率，绘制复方木鸡颗粒抗肝癌抑制率曲线，计算对照品和供试品5组IC50值，计算复方木鸡颗粒抗肝癌活性及实验误差；

（5）根据复方木鸡颗粒抗肝癌活性分级为优、良、可、劣；抗肝癌生物活性低于1.5526UI/mg为劣、高于1.5526 UI/mg且低于1.9962 UI/mg为可、高于2.4398 UI/mg且低于2.4398UI/mg为良，高于2.4398 UI/mg为优。

2.根据权利要求1所述的质量控制与评价方法，其特征在于，所述微孔过滤为0.22 μm微孔滤膜滤过。

3.根据权利要求1所述的质量控制与评价方法，其特征在于，所述步骤（3）中，空白组和给药组给予HepG 2细胞悬液，每孔细胞计数为7500±250 个，培养时间为12 h。

4.根据权利要求1所述的质量控制与评价方法，其特征在于，所述步骤（4）中，复方木鸡颗粒抗肝癌活性及实验误差是按照2015年版《中国药典》生物检定统计法项下的直接测定法或利用药典生物检定统计BS2000软件的直接测定法计算的。

5.根据权利要求1所述的质量控制与评价方法，其特征在于，所述步骤（5）中，复方木鸡颗粒抗肝癌生物活性的平均值2.218 UI/mg的110%、90%、70%作为分级线。

6.根据权利要求1所述的质量控制与评价方法，其特征在于，具体包括下述步骤：

（1）对照品溶液的制备

吸取紫杉醇乙醇溶液溶于DMEM完全培养液，配制成含紫杉醇6 μg/ml、8 μg/ml、10 μg/ml、12 μg/ml和14 μg/ml含药培养液含药培养液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，即得对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备

称取复方木鸡颗粒粉末4.00 g至100 ml锥形瓶中，加入20 ml50%乙醇超声（功率700W，频率40 kHz）20 min，取出后静置放冷，滤过并挥干，计算出膏率；取适量浸膏溶于DMEM完全培养液，配制成含药培养液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；

（3）抑制率的测定

取96孔板，调零组给予培养液，空白组和给药组给予HepG 2细胞悬液，每孔细胞计数为7500±250 个，培养12 h；调零组和空白组给予150 μl培养液，给药组每孔给予150 μl含药培养液，培养36 h；每孔加入10%CCK-8溶液避光培养2.5 h，在450 nm下测定吸光度（OD值），计算抑制率；

（4）数据处理及活性计算

根据对照品和供试品的给药浓度及抑制率，绘制复方木鸡颗粒抗肝癌抑制率曲线，计算对照品和供试品5组IC50值，按照2015年版《中国药典》生物检定统计法项下的直接测定法或利用药典生物检定统计BS2000软件的直接测定法计算复方木鸡颗粒抗肝癌活性及实验误差；

（5）活性强弱分级

根据复方木鸡颗粒抗肝癌活性分级为优、良、可、劣，取15批复方木鸡颗粒抗肝癌生物活性的平均值2.218 UI/mg的110%、90%、70%作为分级线，即抗肝癌生物活性低于1.5526UI/mg为劣、高于1.5526 UI/mg且低于1.9962 UI/mg为可、高于2.4398 UI/mg且低于2.4398UI/mg为良，高于2.4398 UI/mg为优。