[发明专利]一种跨膜蛋白脂质体硅胶复合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种跨膜蛋白脂质体硅胶复合物，其特征在于，是由质量比为1:(300～500):(700～900)的跨膜蛋白、脂质体、硅胶制成。

2.根据权利要求1所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物，其特征在于，是由质量比为1:400:800的跨膜蛋白、脂质体、硅胶制成。

3.根据权利要求1或2所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物，其特征在于，所述跨膜蛋白是镶嵌于脂质体双分子层中，两端暴露于细胞膜内外表面的蛋白质。

4.根据权利要求3所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物，其特征在于，所述跨膜蛋白选用的是细菌视紫红质蛋白、卷曲蛋白受体4。

5.根据权利要求1或2所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物，其特征在于，所述脂质体为具有脂质双层结构的人工膜，是由摩尔比为(70～90):(10～30):(1～10)的二油酰基磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰甘油、7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑基修饰的二油酰基磷脂酰乙醇胺制成。

6.一种权利要求1至5任一项所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将摩尔比为(70～90):(10～30):(1～10)的二油酰基磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰甘油、7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑基修饰的二油酰基磷脂酰乙醇胺混合，加入溶剂充分震摇使其溶解，除去溶剂，加入PBS充分震荡重溶，孵育后超声成囊泡状，微孔滤膜过滤，获得所述脂质体；

将活化后的硅胶与脂质体混合1～60min，在冰浴条件下搅拌1～60min，温度为0～5℃的条件下静置保存过夜，然后在温度为0～5℃的条件下离心分离，沉淀用PBS重悬，重复该步骤2次，获得脂质体-硅胶复合物；

采用Cy3荧光标记试剂盒对细菌视紫红质蛋白进行标记，得到Cy3荧光标记的细菌视紫红质蛋白，蛋白终浓度为1～10mg/mL，将细菌视紫红质蛋白与脂质体-硅胶复合物孵育，获得细菌视紫红质蛋白-脂质体-硅胶复合物；

以上步骤中保持细菌视紫红质蛋白、脂质体、硅胶的质量比为1:(300～500):(700～900)；

或，

将摩尔比为(70～90):(10～30):(1～10)的二油酰基磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰甘油、7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑基修饰的二油酰基磷脂酰乙醇胺混合，加入溶剂充分震摇使其溶解，除去溶剂，加入PBS以及FZD4蛋白充分震荡重溶、孵育，超声成囊泡状，微孔滤膜过滤，获得FZD4-脂质体复合物；

将活化后的硅胶与FZD4-脂质体复合物混合1～60min，在冰浴条件下搅拌1～60min，温度为0～5℃的条件下静置保存过夜，然后在温度为0～5℃的条件下离心分离，沉淀用PBS重悬，重复该步骤2次，获得FZD4-脂质体-硅胶复合物；

以上步骤中保持FZD4、脂质体、硅胶的质量比为1:(300～500):(700～900)。

7.根据权利要求6所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物的制备方法，其特征在于，所述硅胶的活化步骤是：将硅胶在温度为110～130℃的条件下活化0.1～12h；

所述蛋白终浓度为5mg/mL；

所述溶剂为三氯甲烷。

8.一种权利要求1至5任一项所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物作为色谱固定相的应用。

9.一种权利要求1至5任一项所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物作为色谱固定相在复杂体系样品中靶向活性成分筛选中的应用。

10.一种权利要求1至5任一项所述的跨膜蛋白脂质体硅胶复合物作为色谱固定相在全二维跨膜蛋白-脂质体生物色谱系统中的应用。