[发明专利]一种青蛤寡肽的制备方法有效
| 申请号： | 201910973803.8 | 申请日： | 2019-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN110759968B | 公开（公告）日： | 2021-10-22 |
| 发明（设计）人： | 杨最素;余方苗;唐云平;黄芳芳;陈艳 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C07K7/06 | 分类号： | C07K7/06;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 316022 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 寡肽 制备 方法 | ||
1.一种青蛤寡肽的制备方法，所得青蛤寡肽的氨基酸序列为Ile-Leu-Tyr-Met-Pro，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将新鲜的青蛤洗净后、去壳，取内脏，清洗干净后匀浆处理得到青蛤匀浆液；
(2)将青蛤匀浆液与复配溶剂按料液比1:2～4混合均匀获得浸泡液，所用复配溶剂为离子液体EMIMBF4与γ-丁内酯按体积比1:1混合制成；
(3)降低浸泡液温度至-50～-60℃，向浸泡液中通入脉冲电场处理，然后升至室温；
(4)离心分离步骤(3)处理后的浸泡液，回收上清液，去离子水洗涤固体并离心分离得到内脏破碎物；
(5)向内脏破碎物中加入木瓜蛋白酶溶液处理得到酶解液，灭酶活性，离心分离；
(6)将步骤(5)中离心分离后的上清液经滤膜过滤后，超滤膜处理，截留分子量小于3kDa的分子段产物得到粗肽液；
(7)将粗肽液经层析分离，收集MIT法抑制率最高的峰对应的组份，然后经HPLC分离纯化，收集MIT法抑制率最高的峰对应的组份，冷冻干燥，得到青蛤寡肽；
步骤(5)中木瓜蛋白酶的酶解时间2～8小时、酶解温度45～60℃、料液比1:1～4、pH值为5.5～7.0、酶加入量为600～1500U/g；
步骤(7)中层析分离的色谱柱填料为琼脂糖凝胶，检测波长280nm。
2.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中的脉冲电场处理方法为：脉冲数为200～280次，电场强度17～20kV/cm，脉冲宽度为50～60μs，脉冲频率1500～2000Hz，浸泡液在-50～-60℃保持时间为7～8小时。
3.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(4)中将浸泡液离心分离3～5次，然后去离子水洗涤3～5次并离心分离。
4.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(5)中木瓜蛋白酶的酶解时间4小时、酶解温度45℃、料液比1:4、pH值为7.0、酶加入量为1500U/g。
5.根据权利要求1所述的青蛤寡肽的制备方法，其特征在于，HPLC所用色谱柱为ZORBAXSB-C18分析型色谱柱，检测波长214、280nm。
6.根据权利要求1所述 的青蛤寡肽的制备方法，其特征在于，离心分离的温度为在0～4℃，离心转速10000～12000r/min。
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