[发明专利]用于检测AF1Q基因相对表达量的引物、探针及方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201910978176.7 | 申请日： | 2019-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN110656177A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 王淑一;林筱剑;裘振亚 | 申请（专利权）人： | 合肥艾迪康医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 33246 浙江千克知识产权代理有限公司 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 230088 安徽省合*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针 引物 相对表达量 辅助诊断 检测结果 快速检测 内参基因 基因 表达量 试剂盒 可用 白血病 灵敏 样本 监测 检测 | ||
1.用于检测AF1Q基因相对表达量的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针包括：
(1)检测AF1Q基因的上游引物AF1Q-F、AF1Q-R和探针AF1Q-Probe，
AF1Q-F：CGAGGCACTCCCTCCATCTT
AF1Q-R：CCTTGTAGGTGGCTGTATCTGAC
AF1Q-Probe：FAM-ACGCCAGTAATTGATTGATAACAGGAAGC–BHQ；
(2)检测内参基因ABL的上游引物ABL-F、下游引物ABL-R和探针ABL-Probe，
ABL-F：GTGAGTGACATAGCCTCATGTTC
ABL-R：GCAGGCGTGCTCTGTGAAAT
ABL–Probe：FAM-TCAGGGAGGGTTAGGAAAACCAC-BHQ。
2.一种检测样本中AF1Q基因相对表达量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)提取骨髓标本中的总RNA；
(2)将总RNA逆转录成cDNA；
(3)利用AF1Q基因和ABL基因的上下游引物及探针对步骤(2)中的cDNA分别进行扩增；分别检测荧光信号；
AF1Q-F：CGAGGCACTCCCTCCATCTT
AF1Q-R：CCTTGTAGGTGGCTGTATCTGAC
AF1Q-Probe：FAM-ACGCCAGTAATTGATTGATAACAGGAAGC–BHQ；
ABL-F：GTGAGTGACATAGCCTCATGTTC
ABL-R：GCAGGCGTGCTCTGTGAAAT
ABL–Probe：FAM-TCAGGGAGGGTTAGGAAAACCAC-BHQ；
(4)根据AF1Q基因的荧光信号和ABL内参基因的荧光信号，确定样本中的AF1Q基因的相对表达量。
3.检测AF1Q基因相对表达量的试剂盒，所述试剂盒包括检测体系PCR反应液，其特征在于，所述检测体系PCR反应液包括：
(1)检测AF1Q基因的上游引物AF1Q-F、AF1Q-R和探针AF1Q-Probe，
AF1Q-F：CGAGGCACTCCCTCCATCTT
AF1Q-R：CCTTGTAGGTGGCTGTATCTGAC
AF1Q-Probe：FAM-ACGCCAGTAATTGATTGATAACAGGAAGC–BHQ；
(2)检测内参基因ABL的上游引物ABL-F、下游引物ABL-R和探针ABL-Probe，
ABL-F：GTGAGTGACATAGCCTCATGTTC
ABL-R：GCAGGCGTGCTCTGTGAAAT
ABL–Probe：FAM-TCAGGGAGGGTTAGGAAAACCAC-BHQ。
(3)阳性对照品、阴性对照品和空白对照品。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括红细胞裂解液、Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC水等试剂、TOYOBO逆转录试剂。
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