[发明专利]用于检测AF1Q基因相对表达量的引物、探针及方法和试剂盒

说明书

本发明公开用于检测AF1Q基因相对表达量的引物和探针、方法和试剂盒，其包括针对AF1Q的上下游引物和探针，以及针对ABL内参基因的上下游引物和探针。本发明可快速检测样本中是否存在AF1Q基因及其表达量的多少。利用本发明完成的检测结果准确且灵敏，可用于白血病辅助诊断及MRD监测。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种检测AF1Q基因表达水平的试剂盒。

背景技术

AML(急性髓系白血病)是一种临床的分子异构疾病。在我国的恶性肿瘤死亡率中，白血病高居前列。基于此现状，及时准确的诊断作为针对性治疗的前提显得非常关键。

AF1q基因是急性白血病中与MLL基因形成融合基因的一个主要成员。在人类造血系统中起着重要调节作用。其最初是在一名儿童急性白血病患者携带的MLL-AF1Q中被发现，是MLL相关的50多种融合基因中的一种，这些融合基因的表达对白血病的发生发展，以及治疗和预后有着重要的意义。近年来，也有研究表明，AF1Q本身也作为独立的影响因素对白血病有着重要的影响。

AF1Q基因在CD34+的造血干祖细胞中高表达，表达水平随着细胞的成熟而下降，在外周血细胞中低表达或不表达。有研究表明，AF1q基因在白血病细胞系NB4细胞中高表达，而经过ATRA诱导分化后，其表达水平将不同程度下降。

AF1Q基因表达水平与急性白血病及MDS预后有密切关系。AF1Q基因高表达的急性白血病患者复发率和死亡率高，治疗效果差，预后不佳，并且按FAB诊断标准诊断为AML-M1亚型的比例较高，表明其可能代表更原始的遗传表型或直接导致白血病基因出现。AF1Q基因在高危MDS中高表达。并且接受造血干细胞移植的患者AF1Q基因表达水平越高，复发的危险率越高。另外，AF1Q基因导致的染色体畸变也可导致NHL(非霍奇金淋巴瘤)的产生，并与淋巴瘤的组织学分型及肿瘤进展有密切关系。

综上所述，AF1Q基因可能成为白血病判断预后和治疗效果的一个新指标，并可作为非常有价值的分子生物学工具，用于白血病的诊断、危险度分级和微小残留病变的监测，检测AF1Q基因可能为恶性血液病的靶向治疗提供较好的依据。

发明内容

本发明设计了AF1Q基因和ABL基因的引物及探针序列，用荧光定量PCR技术检测AF1Q基因表达水平。通过调整两个基因引物和探针浓度及比例，优化PCR反应体系和反应条件，开发一种AF1Q基因表达水平检测方法，以健康供者AF1Q表达量为参照，用于白血病辅助诊断及MRD监测。

用于检测AF1Q基因相对表达量的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针包括：

(1)检测AF1Q基因的上游引物AF1Q-F、AF1Q-R和探针AF1Q-Probe，

AF1Q-F：CGAGGCACTCCCTCCATCTT

AF1Q-R：CCTTGTAGGTGGCTGTATCTGAC

AF1Q-Probe：FAM-ACGCCAGTAATTGATTGATAACAGGAAGC–BHQ；

(2)检测内参基因ABL的上游引物ABL-F、下游引物ABL-R和探针ABL-Probe，

ABL-F：GTGAGTGACATAGCCTCATGTTC

ABL-R：GCAGGCGTGCTCTGTGAAAT

ABL–Probe：FAM-TCAGGGAGGGTTAGGAAAACCAC-BHQ。

本发明还提供一种检测样本中AF1Q基因相对表达量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)提取骨髓标本中的总RNA；

(2)将总RNA逆转录成cDNA；