[发明专利]从刺松藻中提取分离多糖的方法

说明书

本发明涉及多糖的提取技术领域，针对从刺松藻中提取多糖提取率低、分离困难的问题，提供一种从刺松藻中提取分离多糖的方法，包括以下步骤：先对刺松藻进行包括脱脂的预处理；再用热水提取刺松藻后醇沉，静置过夜，抽滤，加入乙醇洗涤、脱水，烘干得刺松藻热水提粗多糖；最后用强阴离子交换色谱柱分离刺松藻热水提粗多糖：以NaCl溶液梯度洗脱，部分收集器收集，将各组分洗脱液减压浓缩，透析脱盐，冷冻干燥得产物多糖。本发明水提前通过脂肪酸醚硫酸钠和聚山梨酯‑80活性多肽大大促进细胞壁的破裂和多糖的释放，减少了提取时间，提高了多糖提取率，在强阴离子交换色谱柱中通过合适的梯度洗脱制备得到有抗HPV活性的多糖。

技术领域

本发明涉及多糖的提取技术领域，尤其是涉及从刺松藻中提取分离多糖的方法。

背景技术

刺松藻为多年生绿藻，属于绿藻门。藻体呈树枝状，多为鹿角形分支、圆柱形枝体，少数扁平状，内部为海绵形结构，由管状丝状体交织组成，表面有紧密排列的丝状体组成棍棒状囊体。从刺松藻中提取含有糖类的大分子早有研究，例如love J等人证明了该藻水提物中含有葡聚糖、甘露聚糖、高度硫酸化和丙酮酸化的半乳聚糖和硫酸化的阿拉伯聚糖。但是对提取的多糖的分离纯化仍是个难题。另外，这种海藻的细胞壁是一个高度组合的结构，包括31%(w/w)的甘露糖单元连接成的分子链、9%丙酮酸化的硫酸阿拉伯半乳聚糖和少量的羟脯氨酸糖蛋白抗原决定簇，甘露聚糖和丙酮酸化的硫酸阿拉伯半乳聚糖在细胞壁中间，羟脯氨酸糖蛋白抗原决定簇在细胞壁的边缘区域，特别是在椭圆囊的根尖区。这种结构导致刺松藻中多糖提取率低、要破坏细胞壁结构处理麻烦，所以需要一种理想方法解决这一问题。

发明内容

本发明为了克服从刺松藻中提取多糖提取率低、分离困难的问题，提供从刺松藻中提取分离多糖的方法，水提前通过脂肪酸醚硫酸钠和聚山梨酯-80活性多肽大大促进细胞壁的破裂和多糖的释放，减少了提取时间，提高了多糖提取率，在强阴离子交换色谱柱中通过合适的梯度洗脱制备得到有抗HPV活性的多糖。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

从刺松藻中提取分离多糖的方法，包括以下步骤：

1）对刺松藻进行包括脱脂的预处理后干燥备用；

2）干燥的刺松藻用水在80-100 ℃下提取1-4 h，离心，藻渣重复提取多次，合并上清液浓缩后醇沉，3-9 ℃下静置过夜，抽滤，加入乙醇洗涤、脱水，烘干得刺松藻热水提粗多糖；

3）用强阴离子交换色谱柱分离刺松藻热水提粗多糖：以NaCl溶液梯度洗脱，部分收集器收集，将各组分洗脱液减压浓缩，透析脱盐，冷冻干燥得产物多糖。

本发明将刺松藻经过脱脂等预处理后用热水提取、醇沉的方法制得刺松藻热水提粗多糖。离子交换色谱柱具有开放性支持骨架，允许多糖这种大分子自由进入和迅速扩散，故吸附容量大，而且其具有多孔性、表面积大、交换容量大、回收率高的优点；阴离子交换色谱柱有亲水性，对大分子的吸附不太牢固，用温和条件即可洗脱，不会引起变性。

作为优选，所述步骤1）中的预处理还包括破坏细胞壁，所用试剂为脂肪酸醚硫酸钠和聚山梨酯-80的乙醇溶液，其中脂肪酸醚硫酸钠添加质量为刺松藻的0.5-2%，聚山梨酯-80添加质量为刺松藻的3-5%。聚山梨酯-80对疏水性物质有强亲和力，可以结合并溶解细胞壁的脂类，有助于增加细胞壁的通透性。脂肪酸醚硫酸钠可以与羟脯氨酸糖蛋白抗原决定簇反应，破坏细胞壁的外层，使多糖易于渗出被提取；另外脂肪酸醚硫酸钠还可以溶解蛋白，起到除蛋白的作用。乙醇除了作为溶剂，还能溶解细胞壁中磷脂层，促进细胞破壁。利用脂肪酸醚硫酸钠和聚山梨酯-80的乙醇溶液增加细胞壁通透性，相比于物理破碎细胞阀，能保持细胞外形完整，碎片少，浆液粘度低，易于后续的过滤分离。

作为优选，所述破坏细胞壁的过程为：将刺松藻溶于最少量的50-70 ℃的水中，加入乙醇溶液，其中乙醇溶液的体积为水的5-20%，剧烈搅拌2-3 h，离心取水相，过滤取滤饼。