[发明专利]用于单细胞DNA测序文库质量鉴定的引物对组合、方法和试剂盒

权利要求书

1.一种引物对的组合，所述引物对的组合是以下引物对：

SCQ_1F：CTGTGCCCTTGGAGAAGCTCAAGT；

SCQ_1R：TGCTAGAAGCACCAGAGCCACAAG；

SCQ_2F：CGGACATGACGGTGTTCAGCGGC；

SCQ_2R：GATCGTCCAGCTTCACCTCGCCG；

SCQ_3F：CGACAATAAGCCAGTGGAGCTCCA；

SCQ_3R：CGTTGTTTCCAGGTCACTGCCACT；

SCQ_5F：GTGAACGGCAGATCGTAGCCAGC；

SCQ_5R：CATTTACTTGCAGGGGCAACTCAA；

SCQ_7F：TACAGACTCCCCATCCCAAGACCC；

SCQ_7R：GCAGAGGCGTACAGGGATAGCACA；

SCQ_8F：GAAGGCCACTTTGCTGGTAGCACC；

SCQ_8R：TGGATAGTCCCATGCCCTTCTCTC；

SCQ_9F：ATTCAGAGGCCAGTCAACGACATG；

SCQ_9R：GCCCTGCCCACTTGTACAGTGAG；

SCQ_11F：AATACTCGCGCTACCTGCCAGCCC；

SCQ_11R：AACCTGCATCCGGACTTGGTGCTG；

SCQ_12F：AAGGCAGCAGCAAGCATTCCTGGG；

SCQ_12R：TTGGCTGCAACTGAAGGCTCCAGG；

SCQ_13F：TAGGGACCTGTTGCTGCCTTACAT；

SCQ_13R：CGTGCCTAGACGCTGACCATTCCC；

SCQ_20F：ACAGGGACCTTCAGTTGGAGCTGA；

SCQ_20R：GCCCGTCGGTATAAGGATGATCTA；

SCQ_XF：AGTCAGCTTCGTTTTAGGCGTACA；

SCQ_XR：CCTGATGGTGTTGGGGAATCCTCC。

2.一种用于人单细胞DNA测序文库质量鉴定的试剂盒，所述试剂盒装有权利要求1所述的引物对的组合；以及利用所述引物对的组合进行人单细胞DNA测序文库质量鉴定的使用说明书。

3.一种进行人单细胞DNA测序文库质量鉴定的方法，所述方法包括以下步骤：

1) 利用权利要求1所述的引物对的组合或权利要求2所述的试剂盒对人单细胞DNA测序文库、阳性对照和阴性对照进行荧光定量PCR；

2) 利用步骤1)得到的荧光定量PCR结果评估人单细胞DNA测序文库质量；

步骤2)包括：

根据各引物对的扩增CT值、融解曲线峰形，以及Tm值是否在阳性对照Tm值±0.5的范围内判断是否为扩增阳性，引物的扩增CT值＜30，融解曲线峰形单一，且Tm值＝阳性对照Tm值±0.5，即为扩增阳性；

根据荧光定量PCR扩增阳性率评估基因组完整性，其中阳性率 = 有效扩增引物数/总引物数，阳性率越高，人单细胞DNA测序文库基因组完整性越高；和

根据阳性扩增各引物对的扩增CT值计算变异系数CV评估文库均一性，CV值表示为标准差与平均数的比值，CV值越小，文库均一性越好。

4.权利要求1所述的引物对的组合在制备用于人单细胞DNA测序文库质量鉴定的试剂盒或试剂中的用途；

所述人单细胞DNA测序文库质量鉴定是指评估单细胞DNA测序文库基因组完整性及均一性。