[发明专利]一种测定康布斯汀及其代谢产物的方法

权利要求书

1.一种测定康布斯汀及其代谢产物的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

对待检样品进行液-质联用分析；

其中在高效液相色谱仪中，使用包含乙酸铵及甲酸的流动相；以及在质谱分析时，采用ESI+电离模式下，MRM模式测定CA4P、CA4的[M+H]⁺峰，及CA4G的[M+NH₄]⁺峰；

其中高效液相色谱仪的具体参数条件为：

色谱柱：Waters SymmetryShield RP8柱 3.5 μm，50×2.1 mm；

柱温：40℃；

流动相：溶剂A：H₂O，含0.1 % 甲酸，20mM 醋酸铵；溶剂B：甲醇。

2.根据权利要求1所述的测定康布斯汀及其代谢产物的方法，其特征在于

梯度洗脱条件：0~0.5 min以35%溶剂B洗脱，0.5~3.5 min溶剂B从35%匀速增加至70%，3.5~4.5 min溶剂B保持在70%，4.5~4.6 min溶剂B从70%匀速增加至90%，4.6~5.5 min溶剂B保持在90%，5.5~5.6 min溶剂B从90%匀速降低至35%，5.6~7.0 min以35%溶剂B进行柱平衡；

流速：0.30 mL/min；

进样量：2 µL。

3.根据权利要求1所述的测定康布斯汀及其代谢产物的方法，其特征在于

其中进行质谱分析的具体参数条件：

质谱检测采用ESI+离子源，在MRM检测模式下，在30 V的碰撞能量下，检测CA4P的m/z397→350离子对；在25V的碰撞能量下，检测CA4的m/z317→286离子对；在19V的碰撞能量下，检测CA4G的m/z510→317离子对；在26 V的碰撞能量下，检测氘代CA4的m/z321→290离子对。

4.根据权利要求1所述的测定康布斯汀及其代谢产物的方法，其特征在于其中乙酸铵的浓度为5-30 mM。

5.根据权利要求1所述的测定康布斯汀及其代谢产物的方法，其特征在于乙酸铵的浓度为20 mM。

6.根据权利要求1所述的测定康布斯汀及其代谢产物的方法，其特征在于对待测样品检测之前对待测样品进行预处理，具体步骤为：

向人血浆样品中加入含内标氚代CA4标准品的CH₃CN-水溶液沉淀蛋白，其中人血浆样品与CH₃CN-水溶液的体积比为1:4；经振摇5 min和离心后取上清液用于LC-MS/MS分析，进样量为2 µL。

7.根据权利要求1-6任一项所述的测定康布斯汀及其代谢产物的方法，其特征在于

其中待测样品中CA4P的浓度为25.0 ~ 5000 ng/mL；

待测样品中CA4的浓度为2.50 ~ 1000 ng/mL；

待测样品中CA4G的浓度为1.00 ~ 1000 ng/mL。