[发明专利]一种测定康布斯汀及其代谢产物的方法

说明书

本发明提供了一种测定康布斯汀及其代谢产物的方法，该方法包括如下步骤：对待检样品进行液‑质联用分析；其中在高效液相色谱仪中，使用包含乙酸铵及甲酸的流动相；以及在质谱分析时，采用ESI(+)电离模式下，MRM模式测定CA4P、CA4的[M+H]⁺峰，及CA4G的[M+NH₄]⁺峰。本发明的测定康布斯汀及其代谢产物的方法，使采用单一质谱扫描模式一同检测CA4P、CA4及CA4G成为可能，且分析过程无需进行质谱正负离子扫描模式的切换，具有特异、灵敏、简便、重现性好等特点。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体的说涉及一种测定康布斯汀及其代谢产物的方法。

背景技术

康布斯汀(CA4P)为抗血管生成的抗肿瘤药物，由美国OXIGENE公司开发，是CA4的水溶性磷酸盐前药。CA4是从非洲灌木Combretum Caffrum的树皮中分离得到的一种顺式多羟基二苯乙烯类天然产物，结构与秋水仙碱相似，能够竞争性结合靠近β-微管的秋水仙碱结合位点，但亲和力远高于秋水仙碱。然而CA4水溶性差，影响其成药性。CA4P因引入了水溶性的磷酸盐基团大大提高了药物的水溶性，其不与微管结合无抗肿瘤活性，但可在血浆非特异性、内源性的磷酸酯酶作用下转化为其活性代谢产物CA4，从而产生抗肿瘤活性。CA4G为CA4的体内II相结合代谢产物。文献报道其为CA4在体内的主要代谢产物。

为了揭示CA4P给药后人血浆中抗肿瘤活性成分CA4的暴露水平、前药(CA4P)转化为活性代谢产物(CA4)的转化率，以及CA4的主要II相结合代谢产物CA4G的血浆内暴露水平，并与尿液中CA4G结果进行比较，需要建立一个一同定量分析CA4P、CA4及CA4G的高通量方法。

康布斯汀及其体内代谢产物在检测中因不同化合物的色谱保留行为极为相似导致不易分离，以及质谱扫描模式不一致，需要进行离子扫描模式的正负切换，故而无法实现采用单一质谱扫描模式一同检测所有待测化合物。因此目前为止，尚未见采用定量分析的方法同时对人或动物血浆中的CA4P、CA4及CA4G进行测定的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定康布斯汀及其代谢产物的方法，该方法包括如下步骤：

对待检样品进行液-质联用分析；

其中在高效液相色谱仪中，使用包含乙酸铵及甲酸的流动相；以及在质谱分析时，采用ESI(+)电离模式下，MRM模式(质谱的工作模式，意为：multi reactive monitoring，多反应监测扫描。)测定CA4P、CA4的[M+H]⁺峰，及CA4G的[M+NH₄]⁺；

其中乙酸铵的浓度为5-30mM；

优选的乙酸铵的浓度为20mM；

其中高效液相色谱仪的具体参数条件为(如下所涉及的百分比均为体积百分比)：

色谱柱：Waters SymmetryShield RP8柱(3.5μm，50×2.1mm)；

柱温：35-45℃，优选的是40℃；

流动相：溶剂A：H₂O(含0.1％甲酸，5-30mM醋酸铵)；溶剂B：甲醇；

梯度洗脱条件：0～0.5min以35％溶剂B洗脱，0.5～3.5min溶剂B从35％匀速增加至70％，3.5～4.5min溶剂B保持在70％，4.5～4.6min溶剂B从70％匀速增加至90％，4.6～5.5min溶剂B保持在90％，5.5～5.6min溶剂B从90％匀速降低至35％，5.6～7.0min以35％溶剂B进行柱平衡；

流速：0.30mL/min；

进样量：2μL；