[发明专利]基于核酸飞行质谱筛查多种遗传病SNP的方法及所用引物

权利要求书

1.基于核酸飞行质谱筛查多种遗传病SNP所用引物，其特征在于：为针对如下6种遗传病的7个基因进行设计：alpha/beta地贫，甲基丙二酸血症，四氢生物蝶呤缺乏症，高胱氨酸尿症，肝豆状核变性，苯丙酮尿症；

引物包括PCR正、反向引物以及单碱基延伸引物。

2.根据权利要求1所述的基于核酸飞行质谱筛查多种遗传病SNP所用引物，其特征在于：PCR正、反向引物如下表1所述；

表1、6种疾病7个基因的共159的引物序列

3.根据权利要求1或2所述的基于核酸飞行质谱筛查多种遗传病SNP所用引物，其特征在于：所述单碱基延伸引物如下表2所述；

表2、159个位点的延伸引物

4.利用如权利要求1～3任一所述的引物进行的基于核酸飞行质谱筛查多种遗传病SNP的方法，其特征是依次进行如下步骤：

1)、PCR扩增：

PCR扩增体系：PCR缓冲液、MgCl₂、dNTP、0.1μM的PCR引物、PCR高保真酶、待测样本的DNA，水定容至5μL；

表1中编号(表1中第1列所述)相同的PCR引物在一个PCR体系中反应；

PCR扩增体系：

2)、SAP反应：

在步骤1)所得的PCR扩增中加入含SAP酶的SAP混液形成SAP反应体系；所述SAP反应体系中SAP酶的浓度为0.5U/ul；

反应程序：

37℃40分钟

85℃5分钟

4℃保温。

3)、延伸反应：

在步骤2)反应所得物中加入含延伸引物混合物和iPLEX酶的iPLEX延伸混液形成延伸反应体系；

表2中编号(表2中第1列所述)相同的延伸引物混合在一起形成延伸引物混合物；循环反应程序：

4)、将步骤3)所得的反应结果在核酸飞行质谱仪进行检测。