[发明专利]一种他克莫司代谢基因检测试剂盒及其应用方法有效
申请号: | 201910983327.8 | 申请日: | 2019-10-16 |
公开(公告)号: | CN110643698B | 公开(公告)日: | 2020-12-11 |
发明(设计)人: | 魏亮 | 申请(专利权)人: | 成都仕康美生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6883 | 分类号: | C12Q1/6883;C12N15/11 |
代理公司: | 成都市集智汇华知识产权代理事务所(普通合伙) 51237 | 代理人: | 沈璐蓓 |
地址: | 610041 四川省成*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 克莫司 代谢 基因 检测 试剂盒 及其 应用 方法 | ||
1.一种他克莫司代谢基因检测试剂盒,所述试剂盒包括检测CYP3A56986AG基因位点突变的SEQ ID No.1-2所示的引物对和SEQ ID No.3-4所示的探针对、检测ABCB1 1236CT基因位点突变的SEQ ID No.5-6所示的引物对和SEQ ID No.7-8所示的探针对和检测POR1508CT基因位点突变的SEQ ID No.9-10所示的引物对和SEQ ID No.11-12所示的探针对;
所述试剂盒的应用方法包括:(1)确定待测样品CYP3A5 6986AG、ABCB1 1236CT和POR1508CT基因位点突变分型;(2)结果分析,所述结果根据公式P=es/(1+es)计算P值,
其中,S=5.38-0.24×M1-0.37×M2-0.19×M3-0.03×M4,
M1与CYP3A5 6986AG基因位点突变分型相关,当分型为AA时M1=1,分型为AG或GG时M1=2;
M2与ABCB1 1236CT基因位点突变分型相关,当分型为CT或TT时M2=1,分型为CC时M2=2;
M3与POR 1508CT基因位点突变分型相关,当分型为CC时M3=1,分型为CT或TT时M3=2;
M4为年龄。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,每组检测基因突变位点的探针对的5’端分别标记不同的荧光基团,3’端标记MGB。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述探针对的5’端分别标记FAM荧光基团和VIC荧光基团。
4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括real-time qPCRMasterMix和超纯水。
5.一种权利要求1所述的他克莫司代谢基因检测试剂盒的应用方法,所述方法不以疾病诊断为目的,包括:(1)确定待测样品CYP3A5 6986AG、ABCB1 1236CT和POR 1508CT基因位点突变分型;(2)结果分析,所述结果根据公式P=es/(1+es)计算P值,
其中,S=5.38-0.24×M1-0.37×M2-0.19×M3-0.03×M4,
M1与CYP3A5 6986AG基因位点突变分型相关,当分型为AA时M1=1,分型为AG或GG时M1=2;
M2与ABCB1 1236CT基因位点突变分型相关,当分型为CT或TT时M2=1,分型为CC时M2=2;
M3与POR 1508CT基因位点突变分型相关,当分型为CC时M3=1,分型为CT或TT时M3=2;
M4为年龄。
6.根据权利要求5所述的应用方法,其特征在于,所述待测样品选自唾液或口腔上皮。
7.根据权利要求5所述的应用方法,其特征在于,所述试剂盒的应用方法包括如下步骤:
(1)以待测样品的总的游离DNA为模板,加入SEQ ID No.1-2的引物对和SEQ ID No.3-4的探针对,制备PCR反应液,将制备好的反应液转移至96孔板中,进行PCR反应;反应结束后,将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中,读取结果并确定CYP3A5 6986AG基因位点突变分型;
(2)以待测样品的总的游离DNA为模板,加入SEQ ID No.5-6的引物对和SEQ ID No.7-8的探针对,制备PCR反应液,将制备好的反应液转移至96孔板中,进行PCR反应;反应结束后,将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中,读取结果并确定ABCB1 1236CT基因位点突变分型;
(3)以待测样品的总的游离DNA为模板,加入SEQ ID No.9-10的引物对和SEQ IDNo.11-12的探针对,制备PCR反应液,将制备好的反应液转移至96孔板中,进行PCR反应;反应结束后,将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中,读取结果并确定POR 1508CT基因位点突变分型;
(4)根据公式P=es/(1+es)计算P值,
其中,S=5.38-0.24×M1-0.37×M2-0.19×M3-0.03×M4,M1-4的取值如权利要求5所示。
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