[发明专利]一种他克莫司代谢基因检测试剂盒及其应用方法

权利要求书

1.一种他克莫司代谢基因检测试剂盒，所述试剂盒包括检测CYP3A56986AG基因位点突变的SEQ ID No.1-2所示的引物对和SEQ ID No.3-4所示的探针对、检测ABCB1 1236CT基因位点突变的SEQ ID No.5-6所示的引物对和SEQ ID No.7-8所示的探针对和检测POR1508CT基因位点突变的SEQ ID No.9-10所示的引物对和SEQ ID No.11-12所示的探针对；

所述试剂盒的应用方法包括：(1)确定待测样品CYP3A5 6986AG、ABCB1 1236CT和POR1508CT基因位点突变分型；(2)结果分析，所述结果根据公式P＝e^s/(1+e^s)计算P值，

其中，S＝5.38-0.24×M1-0.37×M2-0.19×M3-0.03×M4，

M1与CYP3A5 6986AG基因位点突变分型相关，当分型为AA时M1＝1，分型为AG或GG时M1＝2；

M2与ABCB1 1236CT基因位点突变分型相关，当分型为CT或TT时M2＝1，分型为CC时M2＝2；

M3与POR 1508CT基因位点突变分型相关，当分型为CC时M3＝1，分型为CT或TT时M3＝2；

M4为年龄。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每组检测基因突变位点的探针对的5’端分别标记不同的荧光基团，3’端标记MGB。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述探针对的5’端分别标记FAM荧光基团和VIC荧光基团。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括real-time qPCRMasterMix和超纯水。

5.一种权利要求1所述的他克莫司代谢基因检测试剂盒的应用方法，所述方法不以疾病诊断为目的，包括：(1)确定待测样品CYP3A5 6986AG、ABCB1 1236CT和POR 1508CT基因位点突变分型；(2)结果分析，所述结果根据公式P＝e^s/(1+e^s)计算P值，

其中，S＝5.38-0.24×M1-0.37×M2-0.19×M3-0.03×M4，

M1与CYP3A5 6986AG基因位点突变分型相关，当分型为AA时M1＝1，分型为AG或GG时M1＝2；

M2与ABCB1 1236CT基因位点突变分型相关，当分型为CT或TT时M2＝1，分型为CC时M2＝2；

M3与POR 1508CT基因位点突变分型相关，当分型为CC时M3＝1，分型为CT或TT时M3＝2；

M4为年龄。

6.根据权利要求5所述的应用方法，其特征在于，所述待测样品选自唾液或口腔上皮。

7.根据权利要求5所述的应用方法，其特征在于，所述试剂盒的应用方法包括如下步骤：

(1)以待测样品的总的游离DNA为模板，加入SEQ ID No.1-2的引物对和SEQ ID No.3-4的探针对，制备PCR反应液，将制备好的反应液转移至96孔板中，进行PCR反应；反应结束后，将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中，读取结果并确定CYP3A5 6986AG基因位点突变分型；

(2)以待测样品的总的游离DNA为模板，加入SEQ ID No.5-6的引物对和SEQ ID No.7-8的探针对，制备PCR反应液，将制备好的反应液转移至96孔板中，进行PCR反应；反应结束后，将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中，读取结果并确定ABCB1 1236CT基因位点突变分型；

(3)以待测样品的总的游离DNA为模板，加入SEQ ID No.9-10的引物对和SEQ IDNo.11-12的探针对，制备PCR反应液，将制备好的反应液转移至96孔板中，进行PCR反应；反应结束后，将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中，读取结果并确定POR 1508CT基因位点突变分型；

(4)根据公式P＝e^s/(1+e^s)计算P值，

其中，S＝5.38-0.24×M1-0.37×M2-0.19×M3-0.03×M4，M1-4的取值如权利要求5所示。