[发明专利]一种他克莫司代谢基因检测试剂盒及其应用方法

说明书

本发明公开一种他克莫司代谢基因检测试剂盒，所述试剂盒包括检测CYP3A5 6986AG基因位点突变的SEQ ID No.1‑2所示的引物对和SEQ ID No.3‑4所示的探针对、检测ABCB1 1236CT基因位点突变的SEQ ID No.5‑6所示的引物对和SEQ ID No.7‑8所示的探针对和检测POR 1508CT基因位点突变的SEQ ID No.9‑10所示的引物对和SEQ ID No.11‑12所示的探针对。所述试剂盒能对待测者对他克莫司代谢类型进行准确判断的同时，还能结合数据判断他克莫司代谢程度，为临床安全有效用药提供更可靠的参考依据。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测与他克莫司代谢相关的基因检测试剂盒及其应用方法。

背景技术

药物代谢(Drug metabolism)是指药物在机体内的生物转化过程，药物代谢反应是指药物在生物体内发生的生物转化反应，其产物为代谢产物。研究表明体内药物代谢主要受代谢酶的控制。药物代谢过程中的氧化与结合反应，对药物代谢酶的诱导或抑制，药物代谢的种属、器官组织、性别差异、药物代谢的立体选择性差异以及参与药物代谢的酶的基因多态性等均与药物毒性相关，进而影响临床用药安全。因此，药物代谢研究可以有效阐明临床用药中可能发生的毒副作用，为指导临床合理用药，预防毒副作用发生提供理论支持。

他克莫司是器官移植后预防排斥反应的临床常用药，是免疫抑制剂类药物之一。我国每年大约有150万名患者需要进行器官移植，他克莫司作为一种强有效的免疫抑制剂，其个体差异较大，治疗指数较窄，临床不良反应比较明显，其中最主要的是肾毒性和神经毒性。相同的给药剂量对于不同的患者其血药浓度和体内代谢速率不同。他克莫司强代谢型患者体内血药浓度低，影响治疗效果；而他克莫司弱代谢型患者体内需要浓度过高会出现药物毒性反应。因此，根据患者具体情况制定合理的个体化、安全化治疗方案来降低不良反应的发生具有很大的必要性。

研究表明，CYP3A5是他克莫司代谢的主要酶，其对他克莫司的代谢程度直接影响他克莫司在患者体内的血药浓度，从而影响治疗的效果。研究发现CYP3A5的基因多态性影响CYP3A5酶活性的表达。CYP3A5基因中的一个SNP(单核苷酸多态性)rs776746(CYP3A5*3，6986AG)会导致CYP3A5基因的mRNA过短地剪切，形成一个“不完整的”CYP3A5蛋白，从而导致CYP3A5酶蛋白活性的降低甚至消失。携带CYP3A5突变型等位基因的患者在临床药物治疗过程中的表现与野生型携带者大相径庭。CYP3A5基因出现突变，则会导致病人体内他克莫司的血药浓度大幅度增高，并出现肾毒性、神经毒性、高血压和胃肠道紊乱等一系列药物毒副作用。据统计，目前在中国人群内发现CYP3A5*3突变型频率高达75％，因此在临床中检测CYP3A5基因分型对实现个体化用药和安全用药具有很好的指导作用。

在此基础上，本发明研究者认为CYP450氧化还原酶(POR)是所有肝微粒体细胞色素P450氧化酶的唯一电子供体，在CYP450介导的药物代谢中发挥着重要作用，其特定基因位点如POR 1508CT的突变可能通过影响CYP450的活性进而影响他克莫司在患者体内的代谢水平。ABCB1基因在人类7号染色体上，包含28个外显子，编码一个长度为170KDa的跨膜糖蛋白P-gp。研究认为P-gp蛋白是影响药物体内吸收和排泄的重要因素。因此，ABCB11236CT基因位点上突变能导致P-gp表达量发生显著变化，进一步影响人体对他克莫司的吸收和代谢。

现有技术对于他克莫司体内代谢类型的研究关注点仅在于检测CYP3A5SNPrs776746分型上，而忽略了其他可能影响他克莫司体内代谢的点。如专利文献CN201310316741.6、公开了一种用于检测CYP3A5基因分型的引物组及试剂盒，所述试剂盒能检测CYP3A5基因分型，指导临床对患者他克莫司给药计划。再如专利文献CN201510784899.5公开了一种CYP3A5基因的检测引物组，所述引物组也是通过检测CYP3A5基因分型来指导临床用药。