[发明专利]一种环孢素A代谢基因检测试剂盒及其应用方法

权利要求书

1.一种环孢素A代谢基因检测试剂盒，所述试剂盒包括引物和探针，所述引物和探针由检测ABCB1 3435CT基因位点突变的SEQ ID No.1-2所示的引物对和SEQ ID No.3-4所示的探针对以及检测ABCB1 1236CT基因位点突变的SEQ ID No.5-6所示的引物对和SEQ IDNo.7-8所示的探针对组成，

所述试剂盒的应用方法包括如下步骤：

(1)以待测样品的总的游离DNA为模板，加入SEQ ID No.1-2的引物对和SEQ ID No.3-4的探针对，制备PCR反应液，将制备好的反应液转移至96孔板中，进行PCR反应；反应结束后，将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中，读取结果并确定ABCB1 3435CT基因位点突变分型；

(2)以待测样品的总的游离DNA为模板，加入SEQ ID No.5-6的引物对和SEQ ID No.7-8的探针对，制备PCR反应液，将制备好的反应液转移至96孔板中，进行PCR反应；反应结束后，将96孔板转移至荧光定量PCR读取仪中，读取结果并确定ABCB1 1236CT基因位点突变分型；

(3)根据公式P＝e^s/(1+e^s)计算P值，

其中，S＝6.66+0.32×M1+0.18×M2-0.07×M3，

M1与ABCB1 3435CT基因位点突变分型相关，当分型为CT或TT时M1＝1，分型为CC时M1＝2；

M2与ABCB1 1236CT基因位点突变分型相关，当分型为CT或TT时M2＝1，分型为CC时M2＝2；

M3为年龄；

当P0.813时，属于环孢素A慢代谢型；

当0.813P0.852时，属于环孢素A中间代谢型；

当P0.852时，属于环孢素A快代谢型。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述检测基因突变位点的探针对SEQ IDNo.3-4的5’端分别标记不同的荧光基团，3’端标记MGB，检测基因突变位点的探针对SEQ IDNo.7-8的5’端分别标记不同的荧光基团，3’端标记MGB。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述探针对SEQ ID No.3-4的5’端分别标记FAM荧光基团和VIC荧光基团，探针对SEQ ID No.7-8的5’端分别标记FAM荧光基团和VIC荧光基团。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括real-time qPCRMasterMix和超纯水。