[发明专利]一种环孢素A代谢基因检测试剂盒及其应用方法

说明书

本发明公开一种环孢素A代谢基因检测试剂盒，所述试剂盒包括检测ABCB1 3435CT基因位点突变的SEQ ID No.1‑2所示的引物对和SEQ ID No.3‑4所示的探针对、检测ABCB1 1236CT基因位点突变的SEQ ID No.5‑6所示的引物对和SEQ ID No.7‑8所示的探针对。所述试剂盒能对待测者对环孢素A代谢类型进行准确判断的同时，还能结合数据判断环孢素A代谢程度，为临床安全有效用药提供更可靠的参考依据。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测与环孢素A代谢相关的基因检测试剂盒及其应用方法。

背景技术

药物代谢(Drug metabolism)是指药物在机体内的生物转化过程，药物代谢反应是指药物在生物体内发生的生物转化反应，其产物为代谢产物。研究表明体内药物代谢主要受代谢酶的控制。药物代谢过程中的氧化与结合反应，对药物代谢酶的诱导或抑制，药物代谢的种属、器官组织、性别差异、药物代谢的立体选择性差异以及参与药物代谢的酶的基因多态性等均与药物毒性相关，进而影响临床用药安全。因此，药物代谢研究可以有效阐明临床用药中可能发生的毒副作用，为指导临床合理用药，预防毒副作用发生提供理论支持。

环孢素A(Cyclosporin A，CsA)为11个氨基酸组成的环形多肽，是从土壤霉菌中分离出来的一种强效、选择性的免疫抑制剂。环孢素A广泛用于器官移植及免疫性疾病的治疗，近年来已被用于治疗难治性肾病综合征和其他肾脏疾病。与其他免疫抑制剂相比，环孢素A的特点是选择性的作用于T淋巴细胞，对骨髓中的各系细胞无影响。但是，肾脏毒性是环孢素A治疗中最重要的问题，研究发现，环孢素A可引起肾小球间质及肾血管结构和功能的改变，导致肾间质纤维化、血管透明样变、肾小球硬化等，即使环孢素A血清浓度正常也可发生上述改变。目前临床上常规给药方法是先给不同患者相同剂量的环孢素A，然后通过实时检测患者服药后的血药浓度来调整剂量。虽然临床上使用的方法经过试验可以实现个体化给药，但是往往需要经过一定时间尝试且患者需要接受数次采血，而患者移植初期是最关键的时期，此时不能做到安全有效用药将会对治疗产生很大影响，可能会造成移植失败或肝肾毒性等不良反应。因此，针对不同患者的个体差异进行个体化给药是非常必须的。

P-pg是多药耐药基因(MDR1)编码的产物，研究认为P-gp是影响药物体内吸收和排泄的重要因素。环孢素A口服进人体内后首先通过被动扩散进人小肠上皮细胞，小肠上皮细胞内表达的P-gp不断将环孢素A外排转运至肠腔，使得环孢素A以原型形式排出的比例增加；同时在吸收细胞与肠腔间形成循环，延缓环孢素A进人血液循环，增加环孢素A与肠道CYP3A酶的接触，使得环孢素A在肠道的代谢明显提高，从而减少药物吸收；此外组织和血脑屏障中的P-gp可影响环孢素A在靶组织内的分布，减低环孢素A的抗排斥效能和毒性反应发生；胆小管和肾小管中的P-gp可影响环孢素A和其他底物的清除。

P-gp是由ABCB1(ATP-binding cassette subfamily B member 1)基因编码的，其cDNA全长4660bp，包含28个外显子，转录可得到4.5kb的mRNA。ABCB1基因的C3435T多态性位点(rs1045642)可通过密码子的改变而影响蛋白质的折叠结构，使其对调节分子或底物的亲和力发生变化，从而对药物的代谢产生影响。

专利文献CN201610654232.8公开了一种预测儿童患者药物性肾毒性的生物标志物及应用，说明书中提到CYP3A5*3、ABCB1 2677GT、ABCB13435CT、PRKCB rs11074606、CypA-promoter(-11G/C)、TGF-β1codon25(Arg(25)Pro)基因多态性中的任何一个或多个多态性均可预测儿童患者使用环孢素A发生肾毒性的风险，若同时出现2个或2个以上的多态性预测能力更强；或者CYP3A5*3、ABCB1 2677GT、ABCB13435CT、PRKCB rs11074606、CypA-promoter(-11G/C)、TGF-β1 codon 25(Arg(25)Pro)多态性中多个多态性组成的单倍型也可预测儿童患者使用环孢素A发生肾毒性的风险。