[发明专利]致病疫霉菌培养基MYEB及检测致病疫霉菌对植物致病力的方法

说明书

本发明属于农业生物领域，具体涉及致病疫霉菌培养基MYEB及检测致病疫霉菌对植物的致病力的方法。本发明的致病疫霉菌培养基，包括酵母浸粉、牛肉浸膏、蛋白胨、琼脂粉等组分。本发明的检测致病疫霉菌对植物的致病力包括利用植物无菌苗检测替代培养基所培养致病疫霉菌致病力的步骤。本发明的培养基组分容易获得、配制流程简单，且具有良好菌丝生长速度与产孢能力，以及长期储存恢复能力；本发明的检测方法可以在植物组织培养条件下更加精准地呈现植物与病原菌的互作关系，为番茄致病疫霉菌培养的简化、番茄与致病疫霉菌互作的分子机制研究提供稳定的研究系统和验证平台。

技术领域

本发明属于农业生物领域，具体涉及致病疫霉菌培养基MYEB及检测致病疫霉菌对植物的致病力的方法。

背景技术

致病疫霉菌(Phytophthora infestans(Mont.)de bary)是对茄科农作物危害最大的病原菌，比稻瘟病和小麦锈病更加难以控制，可引起茄科晚疫病，主要危害马铃薯、番茄等粮食蔬菜作物的生产，造成严重经济损失。致病疫霉菌是卵菌的模式菌种，但是卵菌侵染宿主植物的机制目前还不清楚。致病疫霉菌的部分基因组测序工作已于2009年完成，现有技术开发了一种农杆菌介导的致病疫霉菌遗传转化系体系。然而，构建一种配制流程简单、培养基组分容易获得的致病疫霉菌培养方法用于开发更加高效的致病疫霉菌遗传转化方法，显得尤为必要。马铃薯块茎和切片常用来培养致病疫霉菌，但是需要频繁的转移材料，并且所分离病原菌常受到其他微生物的干扰、污染。现有技术还应用一些半合成或有机培养基，以满足致病疫霉菌病原菌的生长和孢子囊形成，其中包括小麦、黑麦、青豆、马铃薯、豌豆、四季豆、酵母粉、甜玉米、玉米、嘴豆、燕麦、谷物、V8果汁、黑豆、红芸豆、大豆和胡萝卜。然而，以上培养基均具有不同程度的配制复杂、培养效率较低等缺陷。对病原体的系统研究需要更加简单、更加高效的培养基，特别是能够为建立高效的致病疫霉菌遗传转化体系奠定良好的培养系统。

对于叶传病害，宿主植物发病叶片常被用于对病原菌的致病性测定，然而致病性检测实验常常在开放环境中进行，由于受到其他微生物的污染，结果往往出现较大误差。为了提高受试植物致病性分析的准确性，需要在没有其他微生物污染的独立环境中进行致病性分析。目前现有技术尚无对致病疫霉菌新型简易培养及植物病原菌瓶内互作方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种致病疫霉菌培养基MYEB。

本发明的再一目的在于提供检测致病疫霉菌对植物的致病力的方法。

根据本发明具体实施方式的致病疫霉菌培养基，所述培养基包括以下组分：酵母浸粉0.5-1.5g/L、牛肉浸膏4-6g/L、蛋白胨4-6g/L、NaNO₃ 0.4-0.6g/L、MgSO₄·7H₂O 0.4-0.5g/L、琼脂粉10-20g/L。

根据本发明具体实施方式的致病疫霉菌培养基，所述培养基包括以下组分：酵母浸粉1g/L、牛肉浸膏5g/L、蛋白胨5g/L、NaNO₃ 0.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.493g/L、琼脂粉15g/L。

根据本发明具体实施方式的检测致病疫霉菌对植物的致病力的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)培养寄主植物无菌苗；

(2)将由上述致病疫霉菌培养基制成的致病霉菌孢子囊悬液接种于步骤(1)培养的无菌苗叶片上，于20℃进行培养，光周期为120μmol.m^-2s^-1强度光照16h和8h黑暗；

(3)观察叶片上的致病疫霉菌，确定寄主植物的抗感病性。