[发明专利]一种慢病毒转导滴度的测定方法在审
| 申请号： | 201910987462.X | 申请日： | 2019-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN110669871A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 牛星;李建强;赵娜;王庆龙;赵莹茜;邢思捷;吕艳云;吴佩佩 | 申请（专利权）人： | 河北森朗生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/02;C12R1/93 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张立娜 |
| 地址： | 050000 河北省石家庄市*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 慢病毒 滴度 转导 阳性率 病毒 工作效率 贴壁细胞 铺板 灵敏度 稀释液 细胞 敏感 感染 检测 | ||
1.K562细胞在测定慢病毒转导滴度中的应用。
2.一种测定慢病毒转导滴度的方法，包括如下步骤：将待测慢病毒的稀释液加入到K562细胞悬液中进行感染，72小时后测定K562细胞阳性率，进而计算得到所述待测慢病毒的转导滴度。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：用含有病毒助感染试剂的K562细胞所用培养基将所述待测慢病毒的原液进行梯度稀释，得到系列慢病毒的稀释液；将所得慢病毒稀释液分别加入到培养相同数量K562细胞的培养体系中；培养72小时后检测K562细胞阳性率，进而计算得到所述待测慢病毒的转导滴度。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：加入所述慢病毒稀释液后，培养体系中K562细胞的含量为2×106个/mL。
5.根据权利要求2-4中任一所述的方法，其特征在于：所述待测慢病毒的转导滴度是根据所述K562细胞阳性率按照如下公式计算所得的：
转导滴度(TU/mL)＝感染时K562细胞数×K562细胞阳性率×稀释倍数×1000/加入的慢病毒样品体积(μL)。
6.根据权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：在所述“将所得慢病毒稀释液分别加入到培养相同数量K562细胞的培养体系中”后，还包括将所述培养体系于35℃872g离心2h的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：在将所述培养体系于35℃872g离心2h后，将所述培养体系置于37℃5％CO2培养箱中培养24h，然后补加等体积的不含有病毒助感染试剂的K562细胞所用培养基，37℃5％CO2培养箱中继续培养48h后测定所述K562细胞阳性率。
8.根据权利要求2-7中任一所述的方法，其特征在于：所述K562细胞培养基的基本成分为1640培养基；和/或
所述病毒助感染试剂为硫酸鱼精蛋白。
9.根据权利要求2-8中任一所述的方法，其特征在于：所述测定K562细胞阳性率为利用流式细胞术检测K562细胞阳性率。
10.如下任一应用：
(A1)权利要求2-9中任一所述方法在指导或估算重组慢病毒在转导T细胞时所用病毒量中的应用；
(A2)权利要求2-9中任一所述方法在指导或估算利用重组慢病毒制备所得的CAR-T细胞阳性率中的应用；
所述重组慢病毒为权利要求2-9任一中所述的待测慢病毒或者与所述待测慢病毒具有相同的包膜蛋白和感染嗜性的其他慢病毒。
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