[发明专利]一种可识别肠癌细胞的树舌灵芝发酵中性杂多糖制备方法

说明书

本发明涉及一种可识别肠癌细胞的树舌灵芝发酵中性杂多糖制备方法,属于天然产物功能成分制备领域。所述的制备方法，以树舌灵芝发酵浸膏、水和乙醇为原料制备树舌灵芝发酵粗多糖及树舌灵芝发酵粗多糖溶液，向所述树舌灵芝发酵粗多糖溶液中加入氯仿与正丁醇的混合溶液，并进行浓缩干燥，得到树舌灵芝发酵除蛋白多糖，用离子交换柱层析方法进行生物大分子分离、纯化得到纯化后的树舌灵芝发酵除蛋白多糖溶液，洗脱、收集合并得到树舌灵芝发酵中性多糖，再次洗脱并收集、冷冻，制得树舌灵芝发酵中性杂多糖。此方法所得树舌灵芝发酵中性杂多糖具有开发为靶向抑制肠癌细胞生长的药物前景，有着重要的经济价值和市场价值。

技术领域

本发明涉及一种可识别肠癌细胞的树舌灵芝发酵中性杂多糖制备方法，属于天然产物功能成分制备领域。

背景技术

树舌灵芝[Ganoderma applanatum(Pers.)Pat]，又称树舌、扁灵芝、平盖灵芝，属于担子菌门，非褶菌目，灵芝菌科，灵芝属。树舌灵芝富含多糖、三萜、生物碱类、酚类、内酯等生物活性成分，具有祛风除湿、清热、止痛、化积、止血、化痰的功效，可用于治疗肝炎、早期肝硬化和风湿性肺结核等疾病，民间还将其治疗消化道癌症。但是，目前树舌灵芝多糖的制备方法均是以多糖含量为评价标准，并无关于利用树舌灵芝多糖针对各类癌症的靶向性识别研究，特别是肠癌等发病率高且难以医治的癌症类型。鉴于现有的制备方法及学术的研究方向局限性，树舌灵芝的应用远低于其自身所具有的实际价值，多项功能有待于开发及市场化。

发明内容

本发明是针对现有研究及技术的不足，旨在提供一种可识别肠癌细胞的树舌灵芝发酵中性杂多糖制备方法。

本发明的技术方案为：一种可识别肠癌细胞树舌灵芝发酵中性杂多糖制备方法，其特征在于，包括：

步骤一、以树舌灵芝发酵浸膏、水和乙醇为原料制备树舌灵芝发酵粗多糖，并向所述树舌灵芝发酵粗多糖中加入水，配制成质量体积浓度5％的树舌灵芝发酵粗多糖溶液；

步骤二、向所述树舌灵芝发酵粗多糖溶液中加入氯仿与正丁醇的混合溶液，并进行浓缩干燥，得到树舌灵芝发酵除蛋白多糖；

步骤三、将所述树舌灵芝发酵除蛋白多糖制备成浓度为10g/L的树舌灵芝发酵除蛋白多糖溶液，并采用离子交换柱层析方法进行生物大分子分离、纯化得到电荷均一的树舌灵芝发酵除蛋白多糖溶液；

步骤四、以蒸馏水为洗脱剂，以1mL/min的流速洗脱，对所述纯化后的树舌灵芝发酵除蛋白多糖溶液进行洗脱，每5分钟收集1管，总洗脱体积为V₁，并将第21管～第35管合并，冷冻干燥，得到树舌灵芝发酵中性多糖；

步骤五、向所述树舌灵芝发酵中性多糖中加入NaCl溶液，使树舌灵芝发酵中性多糖完全溶解；

并利用凝胶柱层析进行树舌灵芝发酵中性多糖的分子量均一化，获得树舌灵芝发酵中性均一化多糖溶液；

其中，每10mg树舌灵芝发酵中性多糖中加入2mL的摩尔浓度为0.15mol/L的NaCl溶液；

步骤六、以0.15mol/L NaCl溶液为洗脱液，以4mL/15min的洗脱流速，对所述树舌灵芝发酵中性均一化多糖溶液进行洗脱，每4mL收集1管，总洗脱体积为V2，合并第21～35管洗脱液，冷冻干燥后得到可与肠癌细胞识别的树舌灵芝发酵中性杂多糖。

所述树舌灵芝发酵浸膏的相对密度为1.4。

所述步骤一中树舌灵芝发酵粗多糖的制备过程为：

步骤1、将树舌灵芝发酵浸膏浸泡在94％～96％的乙醇溶液中得到树舌灵芝发酵浸膏溶解液；其中，浸泡温度为：3℃～6℃，浸泡时间为10～14小时；