[发明专利]一种红花油茶幼胚的组培育苗方法

权利要求书

1.一种红花油茶幼胚的组培育苗方法，其特征在于，包括：将红花油茶的果实幼胚子叶进行愈伤诱导培养、增殖和分化培养、生根及驯化培养；其中：

所述愈伤诱导培养采用暗培养方式；

愈伤诱导培养基包括：MS培养基、0.2-0.8mg/L的NAA、0.2-2.0mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的TDZ、30-70g/L的蔗糖、7-10g/L的琼脂、100-500mg/L的水解酪蛋白、100-500mg/L的水解乳蛋白、50-200mg/L的脯氨酸、50-200mg/L甘氨酸、50-200mg/L的谷氨酰胺、40-100ml/L的椰子水，以及防褐变剂，pH为5.5-5.8；所述防褐变剂选自1-2g/L的交联聚维酮、200-500mg/L的维生素C或5-20mg/L的硝酸银中的至少一种；

所述增殖和分化培养采用先暗培养，再将分化出的子叶型体细胞胚和不定芽转移到光照条件下培养；

所述增殖和分化培养采用的增殖和分化培养基配方包括：1/2的MS培养基，0.05-0.5mg/L的IBA、1.0-3.0mg/L的6-BA、0.001-0.5mg/L的TDZ、30-80g/L的蔗糖、6-11g/L的琼脂、200-500mg/L的水解酪蛋白、200-500mg/L的水解乳蛋白、50-200mg/L的脯氨酸、50-200mg/L的甘氨酸、50-200mg/L的谷氨酰胺、40-100ml/L椰子水，以及防褐变剂，pH为5.5-5.8；所述防褐变剂选自1-2g/L的PPVP、200-500mg/L的维生素C、1-20mg/L硝酸银中的至少一种；

所述生根及驯化培养包括子叶型体细胞胚的生根及驯化培养和不定芽的生根培养；

所述子叶型体细胞胚的生根及驯化培养包括：将成熟的子叶型体细胞胚剥离下来接种到生根培养基进行生根培养；生根幼苗长至3-5cm后移栽到混合育苗基质中，覆上透光覆盖物进行驯化培养；

所述生根培养基包括： 1/2的MS培养基、0.1-2.0mg/L的6-BA、0.01-0.5mg/L的IBA、0.01-1.0mg/LGA3、10-30g/L蔗糖、100mg/L的甘氨酸、100mg/L的谷氨酰胺、250mg/L的水解酪蛋白、250mg/L的水解乳蛋白以及2.3-2.6g/L植物凝胶，pH为5.5-5.8。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养中所述暗培养的条件为：温度为23-27℃，每25-30d继代一次，50-60d获得胚性愈伤组织。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述增殖和分化培养中所述暗培养的条件为：温度为23-27℃，每25-30d继代一次至分化出子叶型体细胞胚或不定芽；

所述光照条件为：温度23-27℃，1900-2300lux光照15-18h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培养的条件为：温度为23-27℃，1900-2300lux光照15-18h后，培养25-35d至子叶型体细胞胚长出根。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不定芽的生根培养包括：将长至2-4cm的不定芽或幼苗基部用生根剂浸泡后，移栽到已消毒的混合育苗基质中进行生根培养。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述生根培养条件为：湿度70%以上、温度18-28℃，1900-2300lux光照15-18h，培养30d-50d，培养期间，浇施营养液和水，至不定芽长出不定根。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述生根剂选自浓度为0.1-0.6mg/L的ABT1、ABT2、ABT3、IBA或GGR6中的一种，不定芽在生根剂中浸泡5-45s。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组培育苗方法还包括：

采集：所述红花油茶的果实是在红花油茶开花后120-150d采集得到的；

消毒灭菌清洗：先用乙醇消毒，清洗3-4次；再用HgCl₂消毒并清洗6-8次。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，选择种皮颜色为白色或白中带有铁锈红色，质地柔软或稍硬的幼胚作为外植体材料。