[发明专利]一种红花油茶幼胚的组培育苗方法

说明书

本发明涉及本发明涉及植物生物工程领域，具体涉及一种红花油茶幼胚的组培育苗方法。红花油茶幼胚的组培育苗方法，包括：将红花油茶的果实幼胚子叶进行愈伤诱导培养、增殖和分化培养、生根及驯化培养；其中所述愈伤诱导培养采用暗培养方式，所述愈伤诱导培养采用的所述愈伤诱导培养基包括：NAA、Kt与TDZ的激素组合，氨基酸，有机添加物及防褐变剂，30‑70g/L蔗糖。所述方法可使红花油茶幼胚的诱导率及分化率明显得到提高，能快速培育大量的红花油茶幼苗，为油茶转基因提供受体材料。

技术领域

本发明涉及植物生物工程领域，具体涉及一种红花油茶幼胚的组培育苗方法。

背景技术

红花油茶(Camellia Chekiangoleosa Hu)，山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)植物。红花油茶的种仁含油率高达61％，茶油中油酸的含量高达85％均显著高于普通油茶、攸县油茶、小果油茶、越南油茶等白花油茶物种。

茶油是我国特有的木本食用油料，其富含油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，有“东方橄榄油”之美誉，含有维生E、角鲨烯、甾醇等微量成分，是一种具有多种保健作用的功能性食用油。油酸称为“安全脂肪酸”，是评定食用油品质的重要指标。油酸易被人体吸收，能够降低低密度脂蛋白胆固醇水平，同时可预防及治疗动脉硬化，对心血管疾病、癌症、糖尿病等疾病有一定的预防作用。红花油茶种子含油率高、茶油品质优，是一种优质木本油料树种；同时其花红色，花形大而美丽，也是一种非常优良的园林观赏树种，具有广泛应用前景。

红花油茶资源分布大多处于野生或半野生状态，自然生境遭受人为因素破坏严重，接近濒危。由于自然繁殖率低，不利于红花油茶资源的挖掘和保护，急需一种新的能大量快速培育浙江红花油茶的培育方法。然而，采用现有的组配育苗方法培养红花油茶幼胚时，存在诱导率及分化率相对较低的缺陷。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提出一种新的组培育苗方法。所述方法可使红花油茶幼胚的诱导率及分化率明显得到提高，能快速培育大量的红花油茶幼苗，为油茶转基因提供受体材料。

本发明所述红花油茶幼胚的组培育苗方法，包括：将红花油茶的果实幼胚子叶进行愈伤诱导培养、增殖和分化培养、生根及驯化培养；其中所述愈伤诱导培养采用暗培养方式，所述愈伤诱导培养采用的所述愈伤诱导培养基包括：NAA、Kt与TDZ的激素组合，氨基酸，有机添加物及防褐变剂，30-70g/L蔗糖。

本发明选择暗培养方式，相比光照培养更有利于诱导率的提高；同时选择NAA、KT和TDZ三种激素组合，结合高浓度蔗糖含量及氨基酸，有机添加物的共同作用，显著提高红花油茶幼胚的诱导率和分化率。

进一步地，所述暗培养过程包括：将幼胚切成小块，将子叶块接种到愈伤诱导培养基中进行暗培养。在一些可选的实施例中，子叶块接种量为10-20块/每皿。所述暗培养的条件：温度为23-27℃，每25-30d继代一次，50-60d获得胚性愈伤组织。

所述愈伤诱导培养基包括：MS培养基、0.2-0.8mg/L的NAA(1-naphthylaceticacid，萘乙酸)0.2-2.0mg/L的KT(6-Furfurylaminopurine，激动素)、1.0-2.0mg/L的TDZ(Thidiazuron，噻苯隆)、30-70g/L的蔗糖、7-10g/L的琼脂、100-500mg/L的水解酪蛋白、100-500mg/L的水解乳蛋白、50-200mg/L的脯氨酸、50-200mg/L甘氨酸、50-200mg/L的谷氨酰胺、40-100ml/L的椰子水，以及防褐变剂，pH为5.5-5.8；所述防褐变剂选自1-2g/L的交联聚维酮、200-500mg/L的维生素C或5-20mg/L的硝酸银中的至少一种。

本发明通过暗条件诱导培养，在激素等组分的诱导下，使幼胚恢复全能性，再通过分化，获得大量的胚性愈伤组织。