[发明专利]用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备及应用

权利要求书

1.用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法，其特征在于，所述超敏蛋白的提取工艺包括依次进行的温水溶解、密度梯度离心、分级超滤膜分离、调节pH值和低温喷雾干燥步骤；

所述温水溶解步骤，按照枯草芽孢杆菌发酵粉与水1：100的比例加入温度为36℃的温水中；

所述分级超滤膜分离步骤中将离心后的上清液进行分级过滤，过滤温度36℃，陶瓷膜设备的进出口压降为0.2～0.25MPa，平均通量为0.3m 3/h，除去菌体和杂蛋白率达到98.99％～99.99％，膜分离后的上清液中超敏蛋白的抑菌效价U＝12000单位/mg；

所述分级过滤包括三级过滤；第一级过滤采用35万分子量陶瓷膜，第二级过滤采用15万分子量陶瓷膜，第三级过滤采用5万分子量陶瓷膜；

所述调节pH值步骤中具体调节方法如下：收集分级超滤膜分离后的清液，调整pH值至4.5，静置36h后，滤除上层上清液得到含沉淀物的浓缩液，重复滤除操作直至浓缩液体积为调整pH值前上清液体积的40％；调节pH值的调节剂为盐酸；

向所述浓缩液中加入30％麦芽粉作为助剂搅拌均匀后，按照40L/h的处理量进行低温喷雾干燥得到超敏蛋白干粉；

所述低温喷雾干燥的进风温度为30～45℃，出风温度为30～40℃；

所采用的枯草芽孢杆菌发酵产物为固态发酵粉，其枯草芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18089；

超敏蛋白的应用方式为叶面喷雾，喷雾最佳时间应在烟草苗叶期进行喷雾，用水稀释300倍，用量1g/㎡。