[发明专利]用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备及应用

说明书

本发明涉及用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备及应用，以枯草芽孢杆菌为生产菌株，通过对枯草芽孢杆菌发酵粉的温水溶解、离心、膜分离、喷雾干燥处理制备超敏蛋白成品，采用两个连续梯度密度离心，再经过分级超滤膜分离，最大限度去除菌体和杂蛋白，得到活性较高的超敏蛋白浓缩液，再利用了超敏蛋白的耐热性，通过低温喷雾干燥技术，使超敏蛋白快速干燥，提高了超敏蛋白制备效率，且麦芽粉作为辅料具有溶解性好、稳定性高、含有丰富微量元素和矿物质等优点。本发明制得超敏蛋白对烟草花叶病毒病的防治具有明显的防治效果，防效可达82.66％；本发明分离纯化超敏蛋白活性高，成本低廉，工艺简单，后期处理损耗较低。

技术领域

本发明涉及生物提取工艺技术领域，尤其涉及用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备及应用。

背景技术

烟草花叶病毒是一种单链RNA病毒，对植物具有极强的侵染性和致病力，寄主范围广泛，可侵染350余种植物，其中以茄科、十字花科、菊科受害最重，这些作物和植物感病后常常造成严重损失甚至毁田。烟草是重要的经济作物，极易感染TMV，烟草花叶病毒可以通过各种农事操作时接触传染的，特别在目前工厂化集中育苗大展，叶片扭曲不长，出现各种坏死斑，并且矮化和死亡，烟叶失去利用价值。因此烟草病毒病是烟草生产和其他易感作物的最重要的植物病害。

预防和防治花叶病一直是烟草及其他茄科植物生产中的重大课题，该病害难于防治，且各种化学防治效果差、残留大。目前对烟草花叶病的防治，国内外已做了大量研究，但目前市场上推广的各种防治烟草花叶病的农药效果均不理想。而且常用的化学农药防治，不但效果低、毒性大还会造成环境污染等严重问题，且长期连续高剂量的施用单一的抗病毒化学农药，容易造成大量农药的残留、环境再污染以及病毒的耐药性提高等问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中常用化学农药防治，效果低、毒性大和污染环境的问题，而提出的用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备及应用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法，所述超敏蛋白的提取工艺包括依次进行的温水溶解、密度梯度离心、分级超滤膜分离、调节pH值和低温喷雾干燥步骤。

在上述的用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法中，所述温水溶解步骤，按照枯草芽孢杆菌发酵粉与水1：100的比例加入温度为36℃的温水中。

在上述的用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法中，所述分级超滤膜分离步骤中将离心后的上清液进行分级过滤，过滤温度36℃，陶瓷膜设备的进出口压降为0.2～0.25MPa，平均通量为0.3m³/h，除去菌体和杂蛋白率达到98.99％～99.99％，膜分离后的上清液中超敏蛋白的抑菌效价U＝12000单位/mg。

在上述的用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法中，所述分级过滤包括三级过滤；第一级过滤采用35万分子量陶瓷膜，第二级过滤采用15万分子量陶瓷膜，第三级过滤采用5万分子量陶瓷膜。

在上述的用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法中，所述调节pH值步骤中具体调节方法如下：收集分级超滤膜分离后的清液，调整pH值至4.5，静置36h后，滤除上层上清液得到含沉淀物的浓缩液，重复滤除操作直至浓缩液体积为调整pH值前上清液体积的40％；调节pH值的调节剂为盐酸。

在上述的用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法中，向所述浓缩液中加入30％麦芽粉作为助剂搅拌均匀后，按照40L/h的处理量进行低温喷雾干燥得到超敏蛋白干粉。

在上述的用于烟草花叶病毒病生物防治的超敏蛋白的制备方法中，所述低温喷雾干燥的进风温度为30～45℃，出风温度为30～40℃。