[发明专利]一种基于LC-MC/MS同时测定肾上腺素及其代谢产物的方法

说明书

本发明涉及化学分析检测领域，具体涉及一种基于LC‑MC/MS同时测定肾上腺素及其代谢产物的方法；本发明所述的方法包括对样品进行预处理的步骤，所述预处理包括：(1)提取：向样品中加入内标混合溶液后加入提取溶剂，所述的样品与内标混合溶液的固液比为5～15g/mL，所述的样品与提取溶剂的固液比为1：3～5g/mL；所述内标混合溶液包含40～200μg/kg的肾上腺素‑d₃、20～200μg/kg的4‑羟基‑3‑甲氧基扁桃酸‑d₃、80～200μg/kg的3,4‑二羟基扁桃酸‑d₃，所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；(2)净化：采用PRiME HLB固相萃取柱。本发明所述的方法能够有效降低基质效应，同时定性和定量检测肾上腺素及其代谢产物；该方法操作简单、灵敏度高、定性能力强、定量准确，在食品安全检测领域具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及化学分析检测领域，具体涉及一种基于LC-MC/MS同时测定肾上腺素及其代谢产物的方法。

背景技术

盐酸肾上腺素作为兽用处方药主要用于动物心脏骤停的急救，缓解严重过敏性疾患的症状，与局部麻醉药配伍以延长局部麻醉持续时间等，是一种重要的兽用处方类药物，同时也是一种内源性α和β受体激动剂。由于肾上腺素口服吸收率低，临床上一般采用皮下注射的方式给药，3～5min显效，作用可维持1h。注射给药后，其会迅速被血液和组织中的儿茶酚-O-甲基转移酶和单胺氧化酶代谢失活，转化成代谢物3,4-二羟基扁桃酸、甲氧基肾上腺素和4-羟基-3-甲氧基扁桃酸，最后经尿液排出体外。因此在对实际样品进行检测中除了原药肾上腺素外，还需关注3,4-二羟基扁桃酸和4-羟基-3-甲氧基扁桃酸等代谢产物。

中国专利文献CN109828071A公开了一种同时检测猪肉中9种注水类药物残留的方法，包括以下步骤：(1)目标物经水溶液提取后，通过大粒径硅藻土柱可实现水的快速吸附，乙腈作为洗脱液逐级渗入，替换掉水溶液的同时，完成了9种常见注水类药物及代谢物的同步净化、浓缩过程；(2)混合标准溶液组成和基质标准曲线制备；(3)经Hypersile Gold C18色谱柱，乙腈-水为流动相梯度洗脱，通过采集目标物的高准确度质量数并自动触发二级，从而实现9种目标物的快速筛查；(4)通过基质标准曲线计算待测物浓度。然而由于动物源性食品的基质条件复杂，加之肾上腺素、4-羟基-3-甲氧基扁桃酸和3,4-二羟基扁桃酸的极性大、分子量小，在分析中易导致严重的基质效应，进而造成绝对回收率低；再加之该方法采用外标法定量，使用高分辨质谱进行分析，因此采用上述方法测得的定量结果存在一定误差，尤其是处于定量限附近样品的定量结果偏差会较大；另外该方法仅限于猪肉样品的检测，适用范围小。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提出一种基于LC-MC/MS(超高效液相色谱串联质谱法)同时测定肾上腺素及其代谢产物的方法，所述的方法特异性强、灵敏度高、操作简便，可实现对肾上腺素、4-羟基-3-甲氧基扁桃酸、3,4-二羟基扁桃酸同时定性及定量的检测，在动物源性样品检测中体现出明显的优势。

具体而言，本发明所述的方法包括对样品进行预处理的步骤，所述预处理包括：

(1)提取：向样品中加入内标混合溶液后加入提取溶剂，所述的样品与内标混合溶液的固液比为5～15g/mL，所述的样品与提取溶剂的固液比为1：3～5g/mL；所述内标混合溶液包含40～200μg/kg的肾上腺素-d₃、20～200μg/kg的4-羟基-3-甲氧基扁桃酸-d₃、80～200μg/kg的3,4-二羟基扁桃酸-d₃，所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；

(2)净化：采用PRiME HLB固相萃取柱。

作为优选，所述提取溶剂为乙腈-水(80+20，0.2％甲酸)。

作为优选，所述固相萃取柱的柱容量为500mg/6mL。