[发明专利]一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法

权利要求书

1.一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、材料准备：将实验所用的各类材料准备妥当，以保证试验顺利进行；

S2、试剂准备：实验所需试剂，待检样品与对照品，需及时备好，以供实验使用；

S3、仪器准备：实验仪器提前清洗完毕后备好；

S4、配制试剂：将实验无法直接使用的试剂，进行人工配制，以供使用，保证实验的顺利进行；

S5、检验方法：主要以电泳作为方法对其检验；

S6、分析判断结果：通过对比对照品分析判断出结果。

2.如权利要求1所述的一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，其特征在于：所述S1材料准备，其具体步骤如下：

S101、准备聚丙烯薄膜聚；

S102、手动裁剪电极条：电极条采用手动裁剪，可以按照自己的需要裁剪；

S103、手动裁剪上样纸：上样纸需要手动裁剪，来确保上样的顺利进行；

S104、手动裁剪干胶膜：手动裁剪干胶膜以备后用。

3.如权利要求2所述的一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，其特征在于：所述S2试剂准备，其具体步骤如下：

S201、准备待检样品及对照品；先将待检样品与工作对照品准备好，以备实验；

S202、准备各类实验试剂：准备丙烯酰胺；甲叉双丙烯酰胺；过硫酸氨；三氯乙酸；硫酸铵；85％磷酸；氢氧化钠；甲醇；无水乙醇；考马斯亮蓝G250；甘油；冰醋酸；疏水硅烷；TEMED；两性载体Ampholytes(pH3.0～10.0、pH4.0～6.5)；Marker(3-10)；Marker；超纯水。

4.如权利要求3所述的一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，其特征在于：所述S3仪器准备，其具体步骤如下：

S301、准备等电聚焦装置；

S302、准备激光扫描光密度计：Bio-Rad激光扫描光密度计；

S303、准备水平震荡仪。

5.如权利要求4所述的一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，其特征在于所述S4配制试剂，其具体步骤如下：

S401、配制30％丙烯酰胺溶液：称取58.2g丙烯酰胺，1.8g甲叉双丙烯酰胺，用150ml纯水溶解，然后定容至200ml，0.22μm膜过滤后置5±3℃避光保存；

S402、配制固定液：三氯乙酸母液：称取100g的三氯乙酸加100mL的水混合，使用前混匀；20％三氯乙酸：取20mL母液与80mL的水混合；

S403、配制染色液：染色储备液：称取125g硫酸铵，用400ml纯水溶解，作为溶液1；称取1.0g考马斯亮蓝G250，加纯水20ml搅拌，加入20g磷酸，溶解后与溶液1混合，定容至1000ml，使用前充分摇匀；工作染色液：取60ml染色储备液，与30ml甲醇混匀，临用新配；

S404、配制10％APS；取0.1g分装好的过硫酸氨一支，1ml超纯水溶解，现用现配；

S405、配制电极液：正极液：0.5mol/L磷酸溶液，量取57.6mL磷酸溶于500mL水，定容至1000mL，0.22μm膜过滤，常温保存；负极液：0.2mol/L氢氧化钠溶液，称取8g氢氧化钠，溶于500mL水，定容至1000mL，0.22μm膜过滤，常温保存；

S406、配制80％甘油：量取甘油160ml，加纯水稀释至200ml，0.45μm膜过滤，常温保存；

S407、配制脱色液：准备250ml 95％乙醇，80ml冰醋酸，670ml超纯水；

S408、配制干胶脱水液：准备无水乙醇200ml，冰醋酸50ml，甘油50ml，100ml超纯水混匀，定容至500ml。