[发明专利]一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法

说明书

本发明公开了一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，包括如下步骤：S1、材料准备；将实验所用的各类材料准备妥当，以保证试验顺利进行；S2、试剂准备；实验所需试剂，待检样品与对照品，需及时备好，以供实验使用；S3、仪器准备；实验仪器提前清洗完毕后备好；S4、配制试剂；将实验无法直接使用的试剂，进行人工配制，以供使用，保证实验的顺利进行；S5、检验方法；主要以电泳作为方法对其检验；S6、分析判断结果；通过对比对照品分析判断出结果；本发明涵盖了材料、试剂、仪器的准备，试剂的合理配制，科学的检验方法，严谨的分析判定，做到了将重组蛋白进行等电聚焦电泳等电点检测，结果科学合理，具有说服力。

技术领域

本发明属于重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测技术领域，具体为一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法。

背景技术

等电聚焦(Isoelectric focμsing，简称IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。由于其分辨力高，重复性好，样品容量大，操作简便迅速，在生物化学、分子生物学及临床医学研究中得到广泛的应用。

因此，我们在2015年版《中国药典》三部等电聚焦电泳法第2法基础上开发了SΜBS-4的等电聚焦电泳法，为改善该方法的分离度和重复性，现对原有等电聚焦电泳方法进行优化和验证，拟确立一种更稳定可靠的分析方法，用于后期重组人红细胞生成素(Fc)融合蛋白原液(rhEPO-Fc)等电点的质控。

虽然已经建立聚丙烯酰胺等电聚焦电泳分析方法对该蛋白进行等电点检测，但该方法的分辨率还有待进一步提高，中国药典2015年版中收录的“重组人促红素注射液(CHO细胞)”等电聚焦检验中凝胶配方含有尿素，所以在重组人红细胞生成素质量控制体系研究中亦比较了等电聚焦配方采用添加尿素和不添加尿素进行等电聚焦电泳，结果添加尿素各条带分辨率明显改善，故我们拟采用等电聚焦配方添加尿素，并对该方法进行优化及验证，以期建立一种分辨率更好的聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(IEF)方法用于SΜBS-4原液等电点的质控。

发明内容

本发明的目的在于：为了解决重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测的问题，提供一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，包括如下步骤：

S1、材料准备：将实验所用的各类材料准备妥当，以保证试验顺利进行；

S2、试剂准备：实验所需试剂，待检样品与对照品，需及时备好，以供实验使用；

S3、仪器准备：实验仪器提前清洗完毕后备好；

S4、配制试剂：将实验无法直接使用的试剂，进行人工配制，以供使用，保证实验的顺利进行；

S5、检验方法：主要以电泳作为方法对其检验；

S6、分析判断结果：通过对比对照品分析判断出结果；

其中，所述S1材料准备，其具体步骤如下：

S101、准备聚丙烯薄膜：即PAG fim(聚丙烯薄膜，GE Healthare)；

S102、手动裁剪电极条：电极条采用手动裁剪，可以按照自己的需要裁剪；

S103、手动裁剪上样纸：上样纸需要手动裁剪，来确保上样的顺利进行；

S104、手动裁剪干胶膜：手动裁剪干胶膜以备后用。

其中，所述S2试剂准备，其具体步骤如下：

S201、准备待检样品及对照品：先将待检样品与工作对照品准备好，以备实验；